02蛋白质化学4要点.ppt

双向凝胶电泳two-dimensional electrophoresis  蛋白质组学研究的重要技术 五、蛋白质含量的测定 紫外吸收法 280 nm吸收值 染料结合法 （Bradford法）考马斯亮蓝-G250： A595 / A465 ( 样品 ) ―A595 / A465 ( 对照 ) * 临床医学上，变性因素常被应用来消毒 及灭菌。 此外, 防止蛋白质变性也是有效保存蛋 白质制剂（如疫苗等）的必要条件。 * 蛋白质溶解度下降或易于沉淀。这是由于次级键破坏，肽链完全伸展，使整个蛋白质分子的空间构象变的松散、不稳定。同时，分子内部的疏水基团暴露而相互凝集成沉淀。 * 盐溶作用主要是由于蛋白质分子吸附某种盐离子后，带电层使蛋白质分子彼此排斥，而蛋白质与水分子间的作用却加强，因而溶解度增高。球蛋白溶液在透析过程中往往沉淀析出，这就是因为透析除去了盐类离子，使蛋白质分子间的相互吸引增加，引起蛋白质分子的凝集并沉淀。 * 水为高介电常数物质，有机溶剂相反，加入有机溶剂，降低水溶液介电常数。电学库仑定律，介电常数降低增加两相反电荷间的吸引力。 * 盐析(salt precipitation)：将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 盐析(salt precipitation)：将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋