实验四 清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳.pptVIP

实验四 血清蛋白的醋  酸纤维薄膜电泳 一 实验原理 电泳的基本原理： 任何一种物质的质点，由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其他带电质点的吸附，会在电场中向一定的电极移动。 一般来说，在碱性溶液中（即溶液的PH值大于等电点pI），分子带负电荷，在电场中向正极移动；而在酸性溶液中刚好相反。移动的速度取决于带电的多少和分子的大小。 醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。 醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，它具有均一的泡沫样的结构，有强渗透性，对分子移动无阻力，作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少，应用范围广，分离清晰，没有吸附现象等优点。 二 实验步骤 1. 浸泡 用镊子取醋酸纤维薄膜1张——分别光泽面和粗糙面——然后在粗糙面离边缘2cm处用铅笔轻轻的画一条与边缘平行的直线（为了点样方便）——然后将薄膜放在巴比妥缓冲液中浸泡20min——用镊子取出纤维薄膜——y用滤纸吸干——平置于载玻片上（粗糙面朝上） 2 点样： 取出2块载玻片——分别滴一滴血清蛋白A和血清蛋白B——然后用盖玻片的平边取样（注意均匀）——然后轻轻的在纤维薄膜的铅笔横线上点样（注意要轻） 3 电泳： 在电泳槽中搭建好滤纸桥——倒入缓冲液（注意两边液面高度一致）——将纤维薄膜架于桥上（点样端靠近负极，点样面朝下）——接好导线——调节电泳仪参数——电泳30min 4. 染色 取出纤维薄膜——放于培养皿染色液中染色10min. 5. 漂洗 取出纤维薄膜——放在漂洗液中漂洗数次——漂洗到可见色带清晰的电泳图谱。 6. 定量测定 * *