(色谱分析电泳)聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE.ppt

SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量 概述 1967年由Shapiro建立。 1969年由Weber和Osborn进一步完善。 他们发现样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂（SDS）以后,蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小,电荷因素可以忽视。 SDS是变性剂，它能破裂蛋白质分子中的氢键和疏水作用，去多肽折叠。 巯基乙醇或DTT是还原剂，能打开二硫键，因此使蛋白质分子处于伸展状态。 此时SDS以其烃链与蛋白质分子的侧链结合成复合物，大约每两个氨基酸残基结合一个SDS分子。 导致： 1、由于SDS是阴离子，使多肽表面覆盖的负电荷远远超过蛋白质分子原有的电荷量，消除了原来的电荷差异。 2、改变了蛋白质单体分子的构象，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都相同，长轴长度随其分子量的大小成正比变化。 这样的蛋白质-SDS复合物，在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只是椭圆棒的长度也就是蛋白质分子量的函数。 注意事项 1.SDS的纯度：市售SDS(A.R.)需重结晶后再用。 2.SDS与蛋白质的结合量：大多数1.4g SDS/g蛋白质 影响蛋白质和SDS结合的因素主要有以下3个： (1)溶液中SDS单体的浓度 (2)样品缓冲液的离子强度 (3)二硫键是否完全被