05第四章化学方法..docVIP

第四章 化学方法简介 4.1 基本要求 （1）了解化学分析的分类、适用、一些常见方法即其基本原理。 化学分析法是生物医学和药学中的常用方法，其分类和适用见于下表4-1： 表4-1 常见化学方法的分类和适用范围 分类 方法 误差 适用 备注 定性分析 化学染色 分析化学物种或结构基团 定量分析 常规分析 滴定分析 灵敏度 0.02 mL 相对误差 0.1~0.5% 含量1%的物种 重量分析 0.1 mg 仪器分析 分光光度 ?g 1~5% 含量1%的物种 荧光/发光 ng 电化学分析 ?g-ng 色谱/电泳 ?g-pg 酶分析 ?g-pg 免疫分析 ?g-pg 原子吸收 ng-pg 针对金属元素 ICP-MS ng-pg 形态分析 光学显微镜 ?m 表面或切片形貌 电子显微镜 ?m-nm 表面或切片形貌 可微区定量ng-pg 原子力显微镜 ?m-nm 表面形貌和力学 共聚焦显微镜 ?m 三维空间和时间扫描 可定量ng 结构分析 质谱 可定量ng-pg 核磁共振 顺磁共振 有单电子物种 红外光谱 x-ray晶体衍射 单晶或多晶体 （2）掌握实验误差的原因和准确表述误差。 实验误差的原因主要有随机误差和系统误差。克服随机误差的方法是增加测定的次数n，从而提高测量的精密度；克服系统误差的方法主要包括校准仪器、增加对照试验和扣除试剂空白。 随机误差用实验数据的精密度来进行表述。精密度标志了测量结果的重现性，精密度的高低通常用标准偏差s和相对标准偏差RSD来表示： 对一组测量数据进行报告时，通常需要报告数据的平均值，标准偏差和测量次数： 准确度标志了测量结果的正确性。准确度的高低通常用绝对误差E或相对误差RE来表示： E =X - μ 准确度由系统误差和偶然误差决定，精密度好是获得高准确度的前提。 （3）掌握有效数字及其运算法则。 有效数字是测量到的数据，位数反映了测量所能够达到的精确度。操作有效数字的要点为：①读取有效数字时，应记录所有的准确数字和第一位不准确数字；②在数字之前的“0”作为数位的定位，不计算在有效位数内；③使用数据的科学计数法标明有效数位；④pH、pK 和lg等对数数值，其有效数字的位数，仅取决于小数部分数字的位数；⑤在运算时，自然数和物理化学常数不受有效数字位数的限制；⑥乘除法运算时，结果的有效位数依据参加运算的数字中有效位数最少的；⑦加减法运算时，结果的有效位数依据参加运算的数字中小数点后位数最少的；⑧计算结果最后的修约规则是一次“四舍六入五成双”。 （4）了解GLP的意义和要求 GLP直译为优良实验室规范，是为在临床试验之前进行的化学与生物实验的规范原则。GLP涉及了实验的各个环节，基本原则包括：完备的实验室资源，完整的实验室管理规则，实验材料的性质明确，实验数据的记录、管理和归档，以及独立的质量检验人员检查。能否执行GLP规范进行科学实验，是当代从事医药学工作的人员的一个基本素质。 对在大学学习的同学，应当掌握GLP的三个关键规范： 实验前确保实验材料、试剂和药品的性质明确，并做好记录； 实验中按照已建立标准操作程序SOP进行实验。在大学教学实验中，实验计划就是学生应当遵守的SOP； 实验中完备进行原始实验记录，包括下列内容：①实验操作内容（WHAT），②实验操作过程（HOW），③实验日期（WHEN），④实验操作人员（WHO）和⑤原始实验结果（DATA）。 （5）熟悉实验室安全的各方面要求。 在实验室中工作，首先是要符合生物安全标准的条件，其次要注意实验室的化学安全。此外，操作放射性同位素化合物，一定要在专门的实验室中进行。 4.2 要点和难点解析 （1）系统误差和偶然误差 vs. 准确度和精密度 系统误差和偶然误差的概念区分 系统误差是实验过程中固定的因素造成的。实验条件一致时，重复测定重复出现，其值一般具有固定的大小和方向，因此又称为可测误差。系统误差按照来源分为方法误差、仪器试剂误差和操作误差。系统误差要通过完善实验设计、校准仪器、做对照试验和扣除试剂空白来减小或消除。 偶然误差是由不可预料的随机因素所造成的，也称为随机误差。其数值的大小和方向均不确定。偶然误差符合统计学的概率分布规律，可通过增加平行测定的次数来减免。 准确度和精密度的概念区分 准确度是指测定值(X)与真实值(μ)接近的程度，标志了测量结果的正确性。精密度是指若干平行测量值之间的接近程度，表示了测定结果重现性的好坏。准确度和精密度是两个分别的概念，但精密度好是获得高准确度的必要条件。 准确度和误差关系：数据的准确