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一、物质的检测 1、荧光物质检测 检测微量抗原或药物 荧光偏振与免疫学方法结合——免疫荧光偏振法 原理：利用生物大分子体系荧光偏振度P的大小与分子的大小成正比关系，以及抗原、荧光标记抗原与抗体结合而形成的一种技术。 结合后的大分子驰豫时间长，荧光偏振就大。 一、物质的检测 2、酶反应动力学 乳酸盐 + NAD+ 乳酸脱氢酶 丙酮酸盐 + NADH + H+ NADH： ?ex：340nm ；?em：450nm 测定乳酸盐浓度：固定NAD和乳酸脱氢酶浓度，加入不同浓度乳酸盐，测一定Δt内的ΔF，作ΔF / Δt对乳酸盐浓度的曲线——标准曲线。 乳酸脱氢酶活性或浓度 一、物质的检测 3、生物大分子的结合研究 生物大分子构象 氨基酸或发光基团所处环境：疏水、亲水、极性大小。 320~360nm 308~320nm ?em 亲水 非极性 色氨酸 蛋白质构象：酶活性中心位置或环境 一、荧光分光光度术中的参量 5、荧光探剂 荧光物质：通常都具有环状共轭双键（π） 天然生物分子：的只有芳香族氨基酸、核黄素、维生素A、叶绿素和NADH等少数分子。 蛋白质：只有含苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸时才具有荧光特性。 核酸：除碱基外也不发荧光。 脂质（脂组成的膜系统）：无荧光特性。 一、荧光分光光度术中的参量 5、荧光探剂 天然荧光生色团结构特点 碳原子骨架 分