4端粒和端粒酶的研究进展.pptVIP

七、端粒酶活性检测技术 存在问题 端粒酶的检测和肿瘤临床病理分期、组织学分型一样，可考虑作为一个独立的恶性肿瘤早期诊断、治疗监测和预后判断的指标。但并非所有的肿瘤标本都可检测到端粒酶，有些类型或阶段肿瘤并无端粒酶活性表达，可能原因有：① 肿瘤前体细胞端粒长度未到激活端粒酶的程度或处于静止期，端粒酶活性下调；②样本中存在抑制物或RNase干扰测定；③细胞通过基因重组延长端粒；④ 端粒酶活性检测限制于表达端粒酶活性细胞的数量；⑤ 端粒酶活性低于实验分析所能检测的水平。 展望 综上所述，端粒和端粒酶在细胞生长及肿瘤发生中都占有重要的地位，尤其是端粒酶的表达水平与恶性肿瘤的发生、发展和预后密切相关，因此已成为新的肿瘤标志物和抗肿瘤治疗的靶点，其重要的应用价值已经引起了世界的特别关注，并已取得重大进展。虽然将端粒酶活性测定应用于临床实践还有相当的距离，但可以预见，端粒、端粒酶活性检测在肿瘤研究中具有广阔的前景，它将为人类在攻克肿瘤这一大难题上创造出一个新的契机。 下课了！ ① 端粒酶能合成串联重复的TTAGGG序列，这提供了端粒DNA重复序列结合因子2（TRF2）的结合位点，有助于防止染色质末端的融合； ② 维持和平衡端粒DNA序列的长度； ③ 修复断裂的染色质末端。Cheung等对端粒酶缺失的秀丽隐杆线虫的研究结果表明，端粒酶除了维持平均的端粒长度外，还在预防和修复零星端粒的断裂中是必需的，这与传统的末端复制问题无关。 三、端粒酶(telomerase)的特点和生物学功能 端粒酶合成端粒DNA的主要步骤： 体内实验表明．端粒酶合成端粒DNA包括四个步骤：1)富含G的3’端作为引物与端粒酶RNA中的端粒DNA互补序列识别、碱基配对；2)端粒酶RNA作为模板，在底物dNTP参与下，按5’→3’ 方向合成新端粒DNA重复序列。使染色质3’末端得以延长；3)端粒酶的转位。端粒酶RNA模板与染色质末端配对解开，重新定位于新合成的端粒DNA重复序列的3’末端。并重复步骤2)的聚合反应；4)互补链的合成。目前一般认为是以新合成的端粒DNA重复序列为模板．在DNA聚合酶作用下完成。 3、端粒酶的主要作用 4、端粒酶活性的调控 ⑴ 端粒DNA结合蛋白 其空间构象可能‘指导’端粒酶与染色体末端部位的结合。 ⑵ 端粒酶RNA 其基因突变可导致端粒酶失活。 ⑶ hTERT 多角度研究表明， hTERT表达水平与端粒酶活性呈正相关。 三、端粒酶(telomerase)的特点和生物学功能 4、端粒酶活性的调控 ⑷ 细胞周期蛋白的影响 体外培养细胞发现，细胞同步化后，处于不同细胞周期阶段的细胞其端粒酶常表现不同活性。 ⑸ 磷酸化与去磷酸化蛋白的作用 蛋白质的磷酸化和去磷酸化是调节酶和蛋白质功能的一种非常重要的机制，蛋白磷脂酶2A可显著抑制端粒酶活性；非特异性蛋白磷酸酶如碱性磷酸酶与黑色素瘤细胞裂解物共孵育时，也抑制端粒酶活性。 三、端粒酶(telomerase)的特点和生物学功能 从端粒酶的基因表达角度： ⑴ hTR、hTERT、hTEPI基因的转录 ⑵ mRNA的剪接和成熟 ⑶ hTR转录后修饰 ⑷ 转译及转译后的修饰 ⑸ 活性端粒酶的组装 4、端粒酶活性的调控 1 端粒酶活性是恶性肿瘤的一种标志 1994年Kim等利用端粒重复序列扩增方法（TRAP)检测了101种肿瘤标本和100个独立的永生化细胞系．发现90种肿瘤标本和98个永生化细胞系中含有端粒酶活性，而同时检测的良性肿瘤及正常体细胞中未发现端粒酶活性。 由于肿瘤细胞是无限增殖的细胞，不会衰老，而90％的肿瘤细胞都具有端粒酶的表达，因此，端粒酶的活性和表达程度与肿瘤的发生、发展及转移间的关系便成为近年来生物学和基础医学共同关注的热点。 四、端粒酶与肿瘤 1 端粒酶活性是恶性肿瘤的一种标志 Hadey提出了“端粒．端粒酶”假说。他认为：由于端粒酶活性的缺乏，随着二倍体细胞有丝分裂的不断进行，端粒DNA的长度便不断缩短，当端粒DNA长度缩短到一定程度。即所谓末端限制片段(TRF)的长度为5～7Kb时，细胞进入危机期M1(crisis M1)，从而触发某种信号，使细胞周期在检查点(check point)处受阻，细胞退出细胞周期并出现衰老。如果细胞此时被病毒转染，或者某些抑癌基因如：P53、Rb等发生突变，则细胞可以越过M1期而继续分裂。 四、端粒酶与肿瘤 1 端粒酶活性是恶性肿瘤的一种标志 这一假说已被越来越多的事实所证实：Harley等发现人的成纤维细胞的端粒长度随着年龄的增长而不断地缩短。de Lange等证明在转化细胞中端粒的长度则不变。精子中的端粒长度不因年龄而变化，似可用精细胞中存在有端粒酶活性来解释。Hira