第7章测序研究报告.ppt

3.3 ABI SOLiD sequencer 它基于连接酶测序法，即利用DNA连接酶在连接过程中进行测序。原理： 第1轮测序：体系中加入DNA连接酶、通用测序引物n和具有3’-XXnnnzzz-5’结构的八聚核苷酸。第1和第2位（XX）上的碱基是确定的，并根据种类的不同在第6-8位（zzz）上加了不同的荧光标记。这种由两个碱基决定的测序方法被称为两碱基测序（two base encoding）。 当八聚核苷酸由于配对而被连接酶连接上时，会发出荧光。在记录下荧光信息后，通过化学方法在第5和第6位之间进行切割，淬灭荧光信号，以进行下个位置的测序。 通过这种方法，每次测序的位置都相差五位，即第一次测第1和第2位，第二次测第6和第7位……在测到末尾后，将新合成的链变性、洗脱。 ★ 用通用测序引物n-1进行第2轮测序。通用测序引物n-1与通用测序引物n的差别是，二者在与接头配对的位置上相差一个碱基，即通用测序引物n-1在通用测序引物n配对位置上向3’端移动了一个碱基。因此在加入DNA连接酶和八聚核苷酸后，可以测定第0和第1位、第5和第6位…… 第二轮测序完成后，接下来再分别加入通用测序引物n-2、通用测序引物n-3、通用测序引物n-4进行第3轮、第4轮、第5轮测序，最终可以完成全部位置的测定，并且每个位置均被测定了两次。 过程： （1）待测DNA文库的构建把待测序列打断成很小