《制肿瘤细胞转移医学项目申报书》.docVIP

二、选题设计论证 依据申报题目，请按下面三部分逐项论述，合计限2000字以内。（请用小四号宋体字） 1、本选题的研究状况述评包括前期研究基础； 临床乳腺癌手术切除肿块后，癌旁组织中残留的癌细胞仍可通过淋巴及血行转移。恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的核心环节——上皮间质转化（EMT），即上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型的细胞。【1】 通过查阅文献及本课题组前期研究表明在肿瘤旁基质注射小窝蛋白-1 (CAV-1)，可明显抑制肿瘤转移，前期研究表明CAV-1通过其脚手架区明显抑制基质细胞中某些EMT信号通路中关键蛋白活性，CAV-1起到蛋白抑制剂的作用，使基质蛋白处于正常静息状态，从而抑制肿瘤细胞发生EMT，进而控制乳腺癌细胞转移。 本课题组已有一项国家专利正在申请，目前课题组已成功构建病毒质粒，并初步完成部分细胞蛋白检测，FuGW-CAV-1能显著抑制肿瘤相关纤维细胞内MMP/TGF蛋白表达；动物在体实验表明在肿瘤癌旁注射FuGW-CAV-1能显著抑制肿瘤细胞的转移。 2、本选题研究的主要内容及创新点； 一、 临床统计发现，CAV-1在乳腺癌基质纤维细胞中的缺失预示肿瘤转移几率的显著增加，即基质中CAV-1的缺失，使原本结合其脚手架区的无活性蛋白质活化，进而使肿瘤基质微环境的能量代谢重构。【1】 由于具体机制尚不明确。本课题拟通过细胞实验及动物实验检测组织细胞蛋白及细胞上清中转化生长因子TGF-(、基质金属蛋白酶MMP9等参与EMT的关键诱导因子。来探究分析CAV-1通过抑制EMT途径来抑制乳腺癌肿瘤转移的机制 二、 细胞外信号包括细胞外基质分子均能诱发肿瘤细胞内的信号级联反应，促进EMT的发生。TGF-β/MMP/ KLF2/Ang1均是EMT中的关键因子，也是本课题中CAV-1抑制EMT的切入靶点。 转化生长因子-β（transforming growth factor-β, TGF-β)主要通过各整合素信号传导途径发挥作用，促进Smad3分子依赖的细胞转录过程，也可以通过非Smad分子依赖的P38MAP激酶途径及GTP酶介导的信号转导途径发挥作用【6】。特别注意的是TGF-β在肿瘤中扮演着双重角色:一方面，它作为一种肿瘤生长抑制因子，能抑制原位肿瘤细胞的增殖，诱发衰老和凋亡来阻止肿瘤的生长;另一方面，在肿瘤的侵袭和转移过程中，TGF-β却扮演着肿瘤生长促进因子的角色，不但促使细胞周期阻滞，加速凋亡，还能诱导维持EMT状态。【4】CAV-1负性调节TGF-β信号，通过CAV-1脚手架区结合TGF-β一型受体激酶活性域，CAV-1抑制TGF-β调节Smad-2的磷酸化及其下游活动，起到激酶抑制剂的作用。【1】 基质金属蛋白酶?(matrix metalloproteinases, MMPs)?是具有降解细胞外基质成分的能力，是目前已知的唯一能降解胶原纤维的酶类，层粘连蛋白，纤维连接蛋白，VI型胶原均是其作用底物，其活性对细胞粘附系统的失活有一定作用。【3.5】MMP在肿瘤生长，血管形成及肿瘤转移中发挥作用。在鼠源性细胞中，CAV-1可在基因水平消除MMP9/12的表达与分泌，而且CAV-1过表达显著降低MMP的分泌。此作用机制不明，推测原因可能为CAV-1抑制了MMP的调节因子CD147/EMMPRIN，二者可消除MMP的活性。【1】 ③ 肿瘤基质中转录因子KLF2 (Krüppel-like factor-2，KLF2)和 血管生成素1（Angiopoietin 1，Ang1），这两种肿瘤血管标志蛋白在过表达CAV-1的基质中， KLF2, Ang1的表达量与对照组比较显著降低，表明CAV-1表达可抑制基质中新生肿瘤血管的形成。【6】分析此机制为：CAV-1可诱导细胞膜相关磷酸酶和张力蛋白（phosphate and tension homology deleted on chromsome ten，PTEN）的表达增高 ，PTEN的作用为抑制纤维细胞的分化和限制细胞外基质重构。乳腺癌病人组织中CAV-1的缺失导致PTEN的下调，从而导致纤维细胞表型的改变，继而向肿瘤相关纤维细胞的转变，而PTEN基因的沉默又可促进乳腺肿瘤的形成，导致大量ECM的堆积和重构，导致炎症和血管再生。【2】肿瘤相关纤维细胞中PTEN与KLF2、Ang1的相关性课题组正在进一步研究，此环节也是本课题需揭示EMT发生发展的重要机制。 试验流程 1. 东北地区人乳腺癌病例统计及组织学检测：确定癌旁基质中CAV-1表达与癌转移的相关性。 2.癌旁组织中CAV-1与TGF-b及其他EMT标志蛋白质的相关性：CO-IP 3.癌旁组织中CAV-1与肿瘤血管形成标志蛋白KLF2的相关性 4.细胞实验：