experiment7普通光学显微镜的使用.ppt

普通光学显微镜的使用 一、实验目的及要求复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油镜的基本原理，掌握油镜的使用方法，观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片。 二、实验原理 （一）油镜头的辨认油镜头有OIoil immersion或HI（homogeneneous immersion）字样，其放大倍数和数值孔径最大，而工作距离最短。 （二）显微镜的分辨率分辨率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离（D）的能力。D值愈小表明分辨率愈高。D值与光线的波长（λ）成正比，与物镜的数值孔径（NA）成反比。显微镜性能的优劣不单是看它的总放大倍数，更重要的是看它分辩率的大小。缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。 数值孔径NA指光线投射到物镜上的最大角度（称镜口角,α）的一半正弦与介质折射率（n）的乘积影响数值孔径大小的因数，一是镜口角，二是介质的折射率。当镜与装片之间的介质为空气时，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，从而增加数值孔径达到提高分辨率的目的。 三、实验材料和用具 1.菌种：枯草芽孢杆菌Bacillus subitilis、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的染色装片。 2.溶剂或试剂：香柏油、二甲苯。 3.仪器及其它用品：显微镜、擦镜纸。 四、操作步骤 一观察前的准备1．将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为3－4cm。坐正，练习用左眼观察。 2．调节光源 3. 调节目镜及数值孔径大小 二低倍镜观察染色装片 三高倍镜观察 四油镜观察 1．升高镜筒，将油镜转至工作位置。在玻片标本区域滴加香柏油。 2．从侧面注视，用粗调节器慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。 3．将光线调亮，目镜观察，用粗调节器将镜筒徐徐上升切忌反方向旋转，当视野中有物像出现时，再用细调节器校正焦距，直至物像看清为止。仔细观察并绘图。 五镜检完毕后的处理 1．上升镜筒，取下载玻片。 2．擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯擦掉残留的香柏油，最后再用干净的擦镜纸擦干残留的二甲苯。 3．将各部分还原。将接物镜呈“八”字形降下，不可使其正对聚光器，同时降下聚光器，转动反光镜使其镜面垂直于镜座。最后套上镜罩，对号放入镜箱中，置阴凉干燥处存放。 五、实验报告分别绘出在高倍镜和油镜下观察到的枯草芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌的形态，注明物镜放大倍数和总放大率。 六、问题和思考 1．用油镜便于观察细菌的依据是什么？ 2．使用油镜应特别注意哪些问题？ 3．当物镜从低倍镜转到高倍镜和油镜时，对照明度有何要求？应如何调节？ * *