第十三节酵母细胞的固定化..docVIP

酵母细胞的固定化主讲：黄冈中学优秀生物教师　王小敏 课题目标： 1、说出固定化酶和固定化细胞的作用和原理； 2、尝试制备固定化酵母细胞，并利用固定化酵母细胞进行酒精发酵； 3、识记固定化技术的常用方法； 4、理解固定化酵母细胞的制备过程； 5、知道固定化酶的实例。 重难点： 制备固定化酵母细胞。 课题背景： 1、酶制剂的优点和缺陷设想：将酶固定在不溶于水的载体上。 2、固定化酶：将酶固定在不溶于水的载体上。设想：酶是细胞合成的，能否将合成酶的细胞直接固定？ 3、固定化细胞：将细胞均匀地包埋于不溶于水的多孔性载体上。 　　优点：成本低，操作更容易。 一、基础知识 （一）固定化酶的应用实例——生产高果糖浆 1、高果糖浆的生产原理： 2、葡萄糖异构酶的固定：将葡萄糖异构酶固定在颗粒状载体上，装入反应柱中。 3、高果糖浆的生产操作： 　　从反应柱上端注入葡萄糖溶液，从下端流出果糖溶液，一个反应柱可连续使用半年。 （二）固定化技术的方法：包埋法、化学结合法和物理吸附法。 1、包埋法：将酶或细胞包裹在不溶于水的多孔的载体中，包埋成格子型或包埋成微胶囊型。固定细胞时选用的载体：明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。 2、化学结合法：将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到纤维素、琼脂糖，离子交换树脂等载体上的固定方式。 3、物理吸附法：将酶吸附到固体吸附剂表面的方法，固体吸附剂多为活性碳、多孔玻璃等。 4、酶和细胞的固定方法的选择和特点 固定对象 酶 细胞 适宜的方法 化学结合法、物理吸附法 包埋法 特点 固定的是一种酶。 体积小，包埋法容易从包埋的材料中漏出丢失。 固定的是一系列酶。 体积大，难以被化学结合和吸附。思考1：对固定酶的作用影响较小的固定方法是什么？吸附法。 　　思考2：将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（酶、细胞）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。 二、实验设计 实验流程：1、酵母细胞的活化： 　　1g干酵母＋10mL蒸馏水→50mL烧杯→搅拌均匀→放置1h，使之活化。 　　注意事项： 　　①选用的干酵母要具有较强的活性，而且物种单一。 　　②活化的目的：是指让处于休眠状态的微生物重新恢复正常生活状态的过程。 2、配制CaCl2溶液： 0.83gCaCl2＋150mL蒸馏水→200mL烧杯→溶解备用。 3、配制海藻酸钠溶液： 　　0.7g海藻酸钠＋10mL水→50mL烧杯→酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化→蒸馏水定容到10mL。 　　注意事项： 　　①海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少。 　　②微火加热并不断搅拌，目的是防止海藻酸钠焦糊。 4、海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合： 　　将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。 　　注意事项： 　　①要等海藻酸钠溶液冷却后才加入酵母细胞是为了防止高温杀死酵母细胞。 　　②搅拌要彻底充分，使两者混合均匀，以免影响实验结果的观察。 5、固定化酵母细胞： 　　以恒定速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液中，形成凝胶珠状颗粒。 　　注意事项： 　　①可利用海藻酸钠制成不含酵母菌的凝胶珠，用作对照。 　　②海藻酸钠胶体在CaCl2这种电解质的作用下，发生聚沉，形成凝胶珠，需稳定30min左右。 6、冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗2～3次。 　　检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法： 　　①用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。 　　②在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。 7、发酵：150mL10%葡萄糖＋固定化酵母细胞→200mL锥形瓶→密封→25℃发酵24h。 　　思考3：发酵过程中锥形瓶为什么要密封？ 　　酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。 　　思考4：锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？ 　　酵母菌进行无氧呼吸产生的。 　　思考5：在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作吗？ 　　需要。 三、结果分析和评价 （一）观察凝胶珠的颜色和形状 　　如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。 （二）观察发酵的葡萄糖溶液 　　利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多气泡，同时会闻到酒味。 课堂小结： - 返回 -同步测试一、选择题 1、使用固定化细胞的优点是（　） A．能催化大分子物质的水解 B．可催化一系列化