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第四部分：酶动力学分析及活性调节（赵武玲老师） ---橄榄枝整理酶的化学本质酶的化学本质：绝大多数的酶是具有催化活性的蛋白质，有些RNA也具有催化活性（称为核酶）。酶与其它催化剂的共性：a催化效率高；b只改变化学反应的速度，不改变化学反应的平衡；c降低反应所需的活化能酶作为催化剂的特性：a比非酶催化剂效率高；b作用条件温和；c具有高度专一性；d受严格调控酶的分类：根据结构特点分：3种单体酶（只含一条多肽链）；寡聚酶（含2条或2条以上）；多酶体系（几种酶比此嵌合形成的体系）。根据酶的化学组成可以分为：2种单成分酶；双成分酶：酶蛋白和辅因子（辅酶和辅基），同时含有酶蛋白质和辅因子的双成分酶叫作全酶。双成分酶中：酶蛋白决定反应的专一性，辅因子co-factor决定反应的性质：辅基：与酶蛋白结合较为牢固，不易分离；辅酶：与酶蛋白结合较为松弛，易分离。其无严格界限酶的活性中心：（三个要点：定义、组成/结构、共同特征）a定义：酶的活性中心是酶分子上直接与底物结合，并进行催化作用的部位。包括两个部位：结合部位：酶与底物结合的部位，决定酶的专一性；催化部位：参加催化的部位，决定酶的催化能力。b组成/结构: 单成分酶的活性中心由酶蛋白上的少数几个氨基酸组成。双成分酶中，除了酶蛋白上的几个氨基酸，辅基或辅酶分子上的某一部分往往也参与活性中心的组成。活性中心的基团都是必需基团。c. 酶活性中心的共同特征: (1)活性中心只占酶分子中很小的一部分;(2)活性中心具有三维结构;(3)活性中心由疏水氨基酸形成口袋，极性氨基酸参与反应;(4)底物靠弱键与酶结合。6. 酶的命名与分类：国际分类编号系统（六大类，顺序不可颠倒）1.氧化还原酶类2.转移酶类3.水解酶类4.裂合酶类5.异构酶类6.连接酶类国际分类编号方案：第一个数字：酶的类别；第二个数字：酶的亚类；第三个数字：酶的亚-亚类第四个数字：酶在亚-亚类中的排序；编号前冠以EC，是国际酶学会缩写，如EC 4.1.1.17. 合酶与合成酶：合酶是催化加成反应的裂合酶；合成酶是反应需要ATP的参与，属于连接酶类。8.酶作用的专一性：结构专一性：键专一性、基团专一性、绝对专一性；立体异构专一性：旋光异构专一性、几何异构专一性。9. 酶作用专一性的假说--诱导契合学说：酶与底物在相互作用过程中，底物诱导酶活性中心发生构象变化，底物分子中的敏感键产生张力并“变形”。10. 酶活力是酶催化一定化学反应的能力。表示方法：酶促反应速度、酶的活力单位酶促反应速度：单位时间内，底物的消耗量或是产物的生成量。通常是测定反应的初速度。1个酶活力单位，是指在特定条件下，在1min内转化1μmol底物的酶量，或是转化1μmol底物的有关基团的酶量。1 IU = 1μmol?min-11个Kat是指在特定条件下每秒钟催化1mol底物所需的酶量。1 Kat = 1 mol?s-1酶的比活力Specific activity 反映了酶的纯度。单位：U /mg U-酶的活力单位，mg-蛋白质含量酶的分离纯化方法与蛋白质的分离纯化方法相似，在分离纯化过程中，要注意：必须保持酶的活力，必须随时跟踪酶的活力。酶促反应动力学1.米氏方程KM ： 米氏常数，即酶促反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。 V=1/2Vmax时，Km=[S]2.kcat表示当酶被底物饱和时，每秒每摩尔酶分子将底物转换成产物的摩尔数。Kcat=Vmax/[E]T3.米氏方程应用：(1)要求反应速度v达到Vmax的99%，其底物浓度应为： v= Vmax[S] /（KM+[S]） 99% Vmax = Vmax[S] /（KM+[S] ）99% × （KM+[S]）= [S] [S]=99 KM(2) 已知某个酶的[S]=3KM，求反应速度v相当于Vmax的百分率。 v = Vmax[S]/ (KM + [S]) v = Vmax· 3 KM / (KM + 3 KM ) v = ? Vmax v = 75% Vmax(3)双倒数作图法例：一个酶促反应中，反应速度与底物浓度的值如下：[S] (mmol· L-1): 2.0 3.3 5.0 10.0v (mmol· L-1 min-1): 2.5 3.1 3.6 4.2（1）请用双倒数作图法计算KM和Vmax并画图。（2）如果酶的浓度为4×10-5 mmol· L-1，请计算kcat（提示：kcat是每秒每个活性中心的反应速度，单位是s-1）。3.三种可逆的抑制作用比较：竞争性抑制作用、非竞争性抑制作用、反竞争性抑制作用不可逆抑制作用：有机磷化合物、有机汞、有机砷化合物、氰化物、烷化剂4. 温度对反应速度的影响：最适温度；温度升高使酶促反应速度加快，但温度升高也可使酶