丝氨酸羟甲基转移酶的电泳制备1讲课.ppt

2、一旦加入TEMED，混匀后立即小心地将分离胶注入准备好的玻璃板间隙中，为成层胶留有足够空间。用毛细管轻轻在其顶层加入几毫升正丁醇，以阻止空气中的氧气对凝胶聚合的抑制作用。 3、聚合完成之后，倒掉覆盖液体，用去离子水洗凝胶上部数次，尽可能用吸水纸吸干顶端的残存液体。 4、配制5%成层胶5ml，插入梳子，小心避免混入气泡，垂直放置室温下。 H2O 3.4ml 30%凝胶贮备液 0.83ml 1.0mol/Ltris-HCl(pH6.8) 0.63ml 10%SDS 0.05ml 10%过硫酸胺 0.05ml TEMED 0.01ml 5、在成层胶聚合时，将样品与加样缓冲液混匀，100℃加热3min。 6、成层胶聚合完成后，用去离子水冲洗梳孔以除去未聚合的丙烯酰胺，将凝胶放入电泳槽上。 7、加样 8、电泳：开始时电压为8V/cm凝胶，染料进入分离胶后，将电压增加到15V/cm凝胶，继续电泳直到染料抵达分离胶底部，断开电源。 9、取下凝胶，固定、染色或进行Western blot分析。 任务1 SHMT电泳制备方案的制定 简介 凝胶聚合原理及相关特性 SDS影响因素 电泳原理 试剂配制 器材准备 操作步骤 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺（acrylamide，简称Acr）和交联剂又称为共聚体的N, N-甲叉双丙烯酰胺（methylene-bisacrylamide，简称Bi