2RNA的提取,琼脂糖电泳及RT-PCR要点解析.pptVIP

实验二 RNA提取、  逆转录PCR * * （8：00~8：05） 实验回顾 实验一、基因组DNA的提取、 酶切及电泳 目的 DNA片段 质粒 TA载体 连接 重组质粒 目的 DNA 转化 无质粒的E.Coli 死亡 有质粒的E.Coli 存活 含抗生素培养基中生长 PCR 2-3min 平板筛选 实验二 RNA提取、逆转录PCR 实验内容 1、小鼠肝脏组织总RNA的提取； 2、RNA的琼脂糖凝胶电泳； 3、以总RNA为模板的逆转录反应； 4、以cDNA为模板的特定基因的RT-PCR: 注：本次实验扩增GAPDH基因(746bp) 5、 PCR产物的电泳及回收 （8：05~8：15） 教师要有下午电泳时 播放的多媒体 PCR Flash 动画 PCR在法医学上的应用 RNA提取操作注意事项 RNA分离的关键因素是减少RNA酶污染。 RNA酶是一类自然界中广泛存在、生物活性非常稳定的酶类。环境中的灰尘、人体汗液、唾液、实验器材表面。RNase耐热、耐酸、耐碱，不需要辅助因子就具有活性作用。 1、尽量避免外源性RNase 污染 a. 操作环境空气洁净。带手套、口罩。 b