叶绿体中色素的提取与分离实验探讨.ppt

2 色素的鉴定 （1）薄层板的制备： 称取2～5g层析用硅胶，加适量水调成糊状，等石膏开始固化时，再加少许水，调成匀浆，平均摊在两块5.0×15cm的层析玻璃板上，再轻敲使其涂布均匀。 放置2天固化后，，贮于干燥器内备用。 （2）点样。 在层析板下端2.0cm处，（用铅笔轻化一起始线，并在点样出用铅笔作一记号为原点。）取毛细管，分别蘸取上一步的提取液，点于原点上，（注意点样用的毛细管不能混用，毛细管不能将薄层板表面弄破，样品斑点直径在1~2mm为宜！斑点间距为1cm）点3个点。 3 展开、显色 * * 绿色植物色素的提取与分离 刘向阳 陈李雄 【实 验】 一、实验原理 1.叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂:酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。 2.色素在薄层层析液上的扩散的速度不同，溶解度高的色素分子随层析液在薄板上的扩散得快，溶解度低的色素分子随扩散液在薄板上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。 二 实验步骤 1. 提取叶绿素 研磨法提取光合色素 材料剪碎 研磨法 加入有机溶剂 研磨、匀浆 过滤 提取液 叶绿体中色素的对比 位于中上层，呈黄色 蓝紫光 黄色 叶黄素 位于最上层，呈橙黄色 蓝紫光 橙黄色 胡萝卜素 类胡萝卜素 （占1／4） 位于最下层，呈黄绿色 红光、蓝紫光 黄绿色 叶绿素b 位于中下层，呈蓝绿色 红光、蓝紫光 蓝绿色 叶绿素a 叶绿素 （占3／4） 定性滤纸上显现的色素层析图谱 吸收光谱主要部位 色素颜色 项目 三、注意事项 1.因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。 2.分离色素时，一定不要让薄板条上的三个点接触到层析液，这是因为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。 3 在叶绿体色素的提取和分离实验中： （1）研磨绿叶时为防止叶绿素被破坏而加入CaCO3的原理是中和细胞中的有机酸。 （4）所画滤液细线越细越齐越好，这样可避免 色素带部分重叠 以取得较好的分离效果。 （5）层析装置加盖的目的是避免层析液挥发影响效果并引起中毒。 （6）滤纸条上色素带最宽的颜色是蓝绿色，相邻色素带间距离最近的是叶绿素a与叶绿素b。 *