生化实验三讲课.pptVIP

离子交换柱层析法分离氨基酸 TEAM 生化三组 华中科技大学 分离氨基酸的方法 1 of 13 生化三组 A沉淀法 B离子交换法 C萃取法 D吸附法 实验目的 1 of 13 生化三组 a学习离子交换树脂分离氨基酸的基本原理。 b掌握离子交换柱层析的基本操作。 c掌握氨基酸和茚三酮显色机理。 离子交换层析原理 2 of 13 生化三组 离子交换法是通过带电的溶质分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换而达到分离目的的方法。离子交换剂是一类具有离子交换功能的高分子材料。因离子交换反应是可逆的，在一定条件下被交换的离子也可以“解吸”，使离子交换剂又恢复到原来的离子形式，所以离子交换剂通过交换和再生可以反复利用。 本实验采用磺酸型阳离子交换树脂分离酸性氨基酸天冬氨酸（Asp，pI2.97）和碱性氨基酸赖氨酸（Lys，pI9.74）的混合液。氨基酸是两性电解质，分子上所带的净电荷取决于氨基酸的等电点和溶液的pH值。在pH5.3条件下，因为pH值低于Lys的PI值，Lys可解离成阳离子结合在树脂上；Asp可解离成阴离子，不被树脂吸附而流出层析柱。在pH12条件下，因pH值高于Lys的pI值Lys可解离成阴离子从树脂上被交换下来。这样通过改变洗脱液的pH值可使它们被分别洗脱而达到分离的目的。 茚三酮反应机理 3 of 13 生