x动物组织中核酸的提取1.pptVIP

实验思路 含有0.14 mol/L NaCl的0.015 mol/L柠檬酸钠溶液 1mol/L NaCl溶液 氯仿-异戊醇（24 : 1, V/V） 95%乙醇 氨水溶液 5% AgNO3溶液 7.2.5%钼酸铵试剂 （取蒸馏水400 mL，加入浓硫酸83 mL，将钼酸铵25 g溶于其中，最后稀释至1 L，冰箱放置一个月不变质） 8. Vc-钼酸铵溶液 （称取还原型抗坏血酸0.53 g溶解于100 mL 2.5%钼酸铵溶液，贮于棕色瓶中，当天配制） 3, 5-二羟基甲苯试剂（取比重1.19的HCl 100mL，加入FeCl3·6H2O 100 mg及二羟甲苯100 mL，混合溶解后，置于棕色瓶中，临用前新鲜配制） 二苯胺试剂（取1 g纯的二苯胺溶于10 mL重蒸馏的冰乙酸中，加入2.75 mL浓硫酸，放置于棕色瓶，临用前新鲜配制） 谢谢！ * 核酸是遗传的分子基础，包括RNA和DNA两种，它们广泛存在于生物细胞中。核酸含量很低，目前无具体材料的数据，但从整体组织看，核酸只有6pg，1个pg相当于10-9克，故核酸含量低，但分子量大，人DNA的长度，可达2米长，因此要从物质组织细胞中分离没有降解的核酸是很困难的。但可根据核酸的某些理化性质对核酸进行提取和鉴定。本实验从动物肝组织中，分离提取RNA和DNA，并用酸水解法将其分解成基本组成成分戊糖、磷酸和碱基，然后分别进行鉴定。分离是关键：核酸往往与蛋白质组成核蛋白，核蛋白在三氯醋酸、乙醇中会发生沉淀，经反复离心、沉淀后将提取的核酸进行水解后分别鉴定。 动物组织中核酸的提取制作人：许祥博 实验目的 了解本实验设计思路 掌握动物组织中DNA提取的原理和操作过程 学习离心技术，掌握离心机的正确使用 动物肝组织 提取 （匀浆） 核酸 分离 （离心） 水解核酸 核酸沉淀物 糖、磷酸、碱基 分别鉴定 实验试剂 【操作】 1.制备匀浆 猪肝 + 沙 + 研磨匀浆 + 生理盐水 2.分离抽提 肝匀浆倒入刻度离心管 立即加入2%三氯醋酸4ml搅匀 静置、离心（3000转/分，3分钟）、倾去上清液 沉淀物中再加入10%NaCl溶液4ml搅匀 再置于沸水浴中加热5分钟，用玻棒不断搅拌 取出冷却后再离心（3000转/分，3分钟） 将上清液倒入小烧杯内 取4ml 95%乙醇，逐滴加入小烧杯 白色沉淀物，静置5分钟，转入离心管 再离心（3000转/分，3分钟） 倾去上清液，即得到核酸纳的白色沉淀 3.核酸水解 含有核酸离心管 加入5%H2SO4溶液4ml 用玻棒搅匀，在沸水中加热5分钟 核酸水解液 离心机使用注意事项： 1.记住离心管编号； 2.离心管必须先平衡后才对称放入离心机； 3.避免液体洒在离心机上面或钻头中； 4.启动后，如有不正常噪音或震动，立即切断电源，分析原因，排除故障。 * 核酸是遗传的分子基础，包括RNA和DNA两种，它们广泛存在于生物细胞中。核酸含量很低，目前无具体材料的数据，但从整体组织看，核酸只有6pg，1个pg相当于10-9克，故核酸含量低，但分子量大，人DNA的长度，可达2米长，因此要从物质组织细胞中分离没有降解的核酸是很困难的。但可根据核酸的某些理化性质对核酸进行提取和鉴定。本实验从动物肝组织中，分离提取RNA和DNA，并用酸水解法将其分解成基本组成成分戊糖、磷酸和碱基，然后分别进行鉴定。分离是关键：核酸往往与蛋白质组成核蛋白，核蛋白在三氯醋酸、乙醇中会发生沉淀，经反复离心、沉淀后将提取的核酸进行水解后分别鉴定。 * *