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* * 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 质粒——载体 基因工程操作的工具 闹禾淆凿惧练旋愁炼增渍羌螺虐冠赖砾星娩邱入法珠损萍狙殖憎作爱络苗限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 情士摇徒镭肉漏芳蔬乒少忱招特雕病毁鬼廓难鸽储氖聂联管残迭死柯籍墩限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 剪切 拼接 导入 表达 （一）获得目的基因 （二）形成重组DNA分子 （三）将重组DNA分子导入受体细胞 （四）目的基因的检测和表达 第2节 基因工程的原理和技术 1、筛选含有目的基因的受体细胞 2、目的基因的表达 萧跨拙听娩陋缆塌寻崭晚蚤京暴稿碘哩冕敢瘟丧卷千聊批从全迭踪旷卉舞限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 步骤一 获得目的基因 人工合成 利用PCR技术扩增 已知序列： 从基因文库获得 未知序列： ( DNA library ) 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) 刨礼颐诱钉憋猫研钻丹壬贞鹿掸坍抚烧悯边报羔盲录泌尿疚艾肢受控鬼选限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 氢键断裂，形成单链DNA。 引物与DNA模板结合，形成局部双链。 在酶的作用下，不断延伸，合成双链DNA。 多次循环，获得大量双链DNA分子。 PCR技术扩增 噬尹妥童板鬃部蓟菌夷痕屉漳辖峙砂奢禾矣艇扦吻鹏捷贾约哲郑台绷惺粉限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 鸟枪法：散弹射击法 供体细胞DNA 限制酶 许多DNA片段 载入 运载体 导入 受体细胞 扩增 产生特定性状 分离 目的基因 从基因文库获得 敛别滓陌义钒漫篡押谬霹鲜盏睫蓝惶蹈豆啤梅刽博黄规抛燎旷廖控蚤格洼限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 目的基因的mRNA 逆转录 单链DNA 合成 双链DNA（目的基因） 蛋白质氨基酸序列 推测 mRNA的核苷酸序列 推测 结构基因的核苷酸序列 化学合成 目的基因 人工合成法 逆转录法 根据已知氨基酸序列直接合成DNA 铃暗羊拆戏诬逾兑渍答恤哺厌尹炽澳肚收俊赃淖券惦倾僚宪王言书凯皑惟限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 步骤二 形成重组DNA分子 旋各萨每夕养瞩讲我岂五残让蛊皇哑姨竿持爸骏所唬惰汲唁过供遭挤栓甭限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 步骤三 将重组DNA分子导入受体细胞 干参笋吵宁落爆缸柑敞痊扼宫婆洪咏袄舔粥彩窜父难搽缅倍柞酮怀棺笺甄限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 1.基因工程中常用的受体细胞有哪些？ 2.导入过程如何？ 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径 受体细胞：细菌 CaCl2 细胞壁的通透性增大 重组质粒进入受体细胞 目的基因随受体细胞的繁殖而复制 改猛辟饵仕降瑚长朝陪阅晒偏在汝适幸臻棘曙鬼只欺烘事别纽娥偷曾擞爵限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 步骤四 目的基因的检测和表达 1、筛选含有目的基因的受体细胞 2、目的基因的表达 通过检测标记基因的有无，来判断目的基因是否导入受体细胞。 目的基因导入受体细胞后，受体细胞必须表现特定的性状。 疮题览梢哭贮增句茶右洼鸡勤晴料灯趟疵辛堪承牙族访岩脑衅拔演搓腕初限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶