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高二生物基因工程概述苏教版 【本讲教育信息】 一. 教学内容： 基因工程概述 二、良好开端 本节重点：基因工程的概念，DNA重组技术的基本工具 本节难点：基因工程的三种操作工具的用途 三、成功之旅 【知识点1】基因工程的概念 （一）基础理论和技术的发展催生了基因工程 （二）基因工程的概念——是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫DNA重组技术。 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物 应用：①基因工程是在DNA分子水平上对生物进行定向改变，赋予其新的遗传特性，打破了不同物种间的生殖隔离；②基因工程引发的生物变异类型为基因重组。 例题1. 切取牛的生长激素和人的生长激素基因，用显微注射技术将它们分别注入小鼠的受精卵中，从而获得了“超级鼠”，此项技术遵循的原理是 A．基因突变：DNA→RNA→蛋白质 B．基因工程：RNA→RNA→蛋白质 C．细胞工程：DNA→RNA→蛋白质 D．基因工程：DNA→RNA→蛋白质 【解析】此题既复习中心法则，又考查基因工程。由题所述是把牛和人的生长激素基因注入到鼠的受精卵中，应属于DNA拼接技术（或DNA）重组技术，即基因工程。 【答案】D 【知识点2】基因工程的基本工具 （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1、主要来源：从原核生物中分离出来的。在原核生物体内，这类酶能将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内进行的，故名限制性核酸内切酶（简称限制酶）。限制酶是基因工程中重要的切割工具。科学家已经从近300种原核生物中分离出了约4000种限制酶。 2、特点：具有专一性，识别双链DNA特定的核苷酸序列，切割特定的部位。并且特定的序列通常表现为中心对称。大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，例如，EcoRI、SmaI限制酶的识别序列均为6个核苷酸序列，也有少数限制酶的识别序列由4、5或8个核苷酸组成。 3、作用：断裂特定部位两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 4、产物：用限制性核酸内切酶切割形成的末端有两种：即黏性末端与平末端。 ①黏性末端：是限制酶在识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开形成的，如图所示 ②平末端：是限制酶在识别序列的中心轴线处切开形成的。如图所示 （二）DNA连接酶——“分子缝合针” 1、作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开了的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。 2、种类 ⑴E?coli DNA连接酶：只能缝合双链DNA片段互补的黏性末端，而不能将双链DNA平末端进行连接。 ⑵T4 DNA连接酶：既可缝合DNA片段互补的黏性末端，又可缝合双链DNA片段的平末端。但连接平末端之间的效率比较低。 3、DNA连接酶和DNA聚合酶的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’端的羟基上,形成磷酸二酯键 （三）基因的载体——“分子运输车” 1、载体的作用：载体是基因运输的工具，在基因操作过程中，使用载体有两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因送到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 2、载体必须具备的条件 ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制； ②有一个至多个限制酶切点，以便与外源基因连接； ③具有某些标记基因，以便进行筛选。 3、载体的种类 目前，基因工程经常使用的载体主要有以下几类： ⑴细菌的质粒：它是最常用的载体。 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外的，具有自我复制能力的双链环状DNA分子（一般有1—200kb,kb为千碱基对）。有的细菌只有一个，有的细菌有多个。 质粒DNA分子上有一个至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段（基因）插入其中；携带DNA片段的质粒进入受体细胞后，停留在细胞中进行自我复制，或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制；质粒DNA分子上有特殊的遗传标记基因，如抗四环素、氨苄青霉素等标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 ⑵噬菌体 ⑶动植物病毒 它们来源不同，在大小、结构、复制以及插入片段大小上也有很大差别。这些基因工程载体就相当于一种运输工具，因此将它们比喻为“分子运输车”。 例题2. 下图表示限制酶切割某DNA的