猪鼻支原体表面可变脂蛋白vlpA黏附宿主细胞功能鉴定分解.docVIP

猪鼻支原体表面可变脂蛋白vlpA黏附宿主细胞功能鉴定 必雄1，倪博1，韦艳娜 （1 江苏省农业科学院兽医研究所( 农业部兽用生物制品工程技术重点实验室( 国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014；2山西农业大学，太谷，山西 030800） 摘要：【目的】猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis）可引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、肺炎及中耳炎等多种慢性炎症，感染率极高，且与人类肿瘤的发生有关，对人类健康构成威胁。已有研究表明猪鼻支原体表面可变脂蛋白（vlp）家族参与了黏附宿主细胞过程，本主要vlp家族之一vlpA黏附宿主细胞功能，区。【方法】根据GenBank中已公布的vlpA的基因序列，，利用PCR扩增vlpA基因，或者人工合成区重复重复次数不等的一系列vlpA，均克隆于pET-32a(+)进行表达，获得目的蛋白。利用固相合成法制备vlpA区重复。用间接免疫荧光试验和微孔板黏附试验鉴定重组vlpA蛋白肽段的黏附功能。【结果】通过诱导表达和镍柱亲和层析纯化，成功获得纯度较高的各个目的蛋白。间接免疫荧光试验证实了vlpA参与介导猪鼻支原体黏附宿主细胞；微孔板黏附试验定量检测不含区和含有重复次数为3、6、9、12次区vlpA重组蛋白，以及区的能力，结果表明区含有明显的黏附表位，区；vlpA黏附能力与其区重复次数有关，且随着重复次数增多，黏附能力下降。本研究结果研