《转基因食品》-第二章-生物技术.ppt

转基因动物实例四 正在进行转基因山羊的实验 乳汁中分泌人凝血因子IX的转基因山羊 上海交通大学医学遗传研究所 just a joke 谢谢！ * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * P395 SDS——十二烷基硫酸钠。 * * * * * 植物遗传转化的受体系统及其特性　　（1）植物组织受体系统：受伤的细胞容易受到病毒或质粒的感染。这些病毒或质粒上的某些DNA通过各种不同的方式转移到受伤的植物细胞，并形成愈伤组织。愈伤组织可以培养成完整的转化植株。该受体系统转化率高，可获得较多的转化植株，取材广泛、适用性广。但再生植株无性系变异较大，转化的外源基因稳定性差，嵌合体多。　　（2）植物细胞原生质体：是植物细胞除去细胞壁后的部分，是一个质膜包围的“裸露细胞”。原生质体在合适的条件下具有分化、繁殖并再生成完整植株的能力，具有全能性。原生质体在体外比较容易完成一系列细胞操作或遗传操作，互相之间可以发生细胞融合，而且还可以直接高效的捕获外源基因。但缺点是嵌合体少，遗传稳定性更差，培养周期长，难度大，再生频率低。　　（3）生殖细胞受体系统：是以植物生殖细胞如：花粉细胞、卵细胞为受体细胞进行基因转化的系统。目前主要以两个途径利用生殖细胞进行基因转化：一是利用组织培养技术进行花粉细胞和卵细胞的单倍体培养，诱导愈伤组织细胞，进一步分化发育成单倍体植株，从而建立单倍体的基因转化系统；二是直接利用花粉和卵细胞受精过程进行基因转化，如花粉管导入法、花粉粒浸泡法、子房微针注射法等。由于该受体系统与其它受体系统相比有许多优点，如：具有全能性的生殖细胞直接为受体细胞，具有更强的接受外源DNA的潜能，一旦将外源基因导入这些细胞，犹如正常的受精过程会收到“一劳永逸”的效果；利用植物自身的受粉过程，具有操作方法方便、简单。不足之处是利用该受体系统进行转化受到季节的限制；只能在短暂的开花期进行，且无性繁殖的植物不能采用。 * * 植物遗传转化方法　　植物遗传转化方法可分两类；一类是载体介导的转化，即利用另一种生物实现基因的转入与整合。目前这种载体有质粒载体和病毒载体两种。相应地有两种转化方法。即通过机械接种感染植物的病毒载体转化方法和通过农杆菌质粒介导的基因转化方法。但由于农杆菌质粒介导的基因转化方法稳定性、重复性好，设备简单，操作方便，故应用广泛。　　另一类转化方法是基因直接转化。由于农杆菌载体转化系统对单子叶植物的局限性，同时试验表明：转化DNA整合植物基因组不一定需要特殊的T-DNA序列或结构。根据这一事实现在发展了一系列将DNA导入植物的技术，其发展前景比农杆菌毫不逊色。所谓DNA直接导入转化就是不依赖农杆菌载体和其它生物媒体，将特殊处理的裸露DNA直接导入植物细胞实现基因转化的技术，因此也称为无载体DNA介导转化。其中基因枪法最常用，而且操作简便、快速，甚至可克服无菌的困难；但缺点是转化频率低。目前大多数只报道转化后的瞬时表达，而稳定遗传的比例很低，有待于进一步发展完善。 * * * * * * * * * 4 目的基因的表达和检测 处理的受体细胞中是否真正导入了目的基因，导入了多少目的基因，需进行检测——针对目的基因。 目的基因能否在受体内进行表达（复制、翻译），需进行检测——针对表达产物。 表达产物的进一步的代谢是否产生最终目标产物，需检测——针对最终转基因产品的性状。 4.1 进行检测的原因 染色体基因水平： 是否整合了外源基因以及整合的位点和拷贝数。 转录水平： 转基因的 mRNA 的存在与否以及表达水平。 翻译水平： 转基因的蛋白质的表达以及功能检测。 个体水平： 抗虫能力、抗病能力、产物活性等。 4.2 进行检测分析的策略 核酸（DNA），位于细胞核 Nucleus 蛋白质 功能产物 mRNA（信使RNA） 由DNA转录而来 外源基因表达产物检测的过程就是对特异性mRNA或蛋白质的检测。 检测特异性mRNA的方法 Northern杂交法 检测特异性蛋白质的方法 生化反应检测法 免疫学检测法 生物学活性检测法 当转化的外源目的基因表达产物没有可供直接检测的性质时，可把外源基因与标记基因或报告基因一起构成嵌合基因，通过检测嵌合基因中的标记基因或报告基因间接确定外源目的基因的存在和表达。 PT-PCR法 4.3 检测分析的技术方法 免疫学检测 免疫沉淀法 酶联免疫吸附法 Western沉淀法 固相放射免疫法 表达产物生物学活性检测 当外源基因的表达产物是一种酶蛋白时，可根据酶的催化反应来确定外源基因表达与否和表达的程度。 该方法简便且易于操作，在反应体系中加入特定的底物和基因表达产物的抽提物就可根据反应现象进行定性和定量的分析。 基因表达