紫外分光光度计测蛋白、核酸及使用方法.pptVIP

紫外分光光度计使用方法 比色池拉到样品组对准光源， 测试。测量结果依次显示在屏幕上。记录数据。 紫外分光光度计使用方法 切换波长，同样程序再测量其他波长处样品的光吸收值。。 关机 实验结束，关闭电源，清洗比色皿。 紫外分光光度法测定蛋白质含量 1、实验目的 （1）学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理； （2）掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术； （3）掌握紫外分光光度计的的使用方法。 2、实验原理 蛋白质组成中常含有酪氨酸和色氨酸等芳香族氨基酸，在紫外光280nm波长处有最大吸收峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度呈正比，故可用紫外分光光度计通过比色来测定蛋白质的含量。由于核酸在280nm波长也有光吸收，对蛋白质测量有一定的干扰作用，但核酸的最大吸收峰在260nm。如同时测定260nm的光吸收，通过计算可以消除其对蛋白质测定的影响。因此如溶液中存在核酸时必须同时测定280nm及260nm的吸光度，才能通过计算测定溶液中的蛋白质浓度。 3、仪器与试剂 紫外可见光分光光计。 未知蛋白质标准溶液，可用结晶牛血清蛋白或酪蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白质含量，根据其纯度配制成1~2.5mg/mL 的溶液。 0.9%NaCl溶液。 4、实验步骤 在紫外分光光度计上，将未知的蛋白质溶液小心盛于石英比色皿中，以生理盐水为对照，测得280nm和260nm两种波长的吸光度（A