绿豆芽淀粉酶的活性及应用.ppt

绿豆芽淀粉酶的活性及应用 生物工程1302-17号 卢丹 摘要 目的：测定绿豆芽生长不同时期酶的活性。 方法：采用正交试验设计方法, 对影响绿豆芽淀粉酶活性测试的“最适条件”进行研究。 结果：绿豆芽在生发 84h 左右, 温度 60℃, p H5. 0, 底物体积质量 20g /L , 酶体积质量0. 5g /L , 底物与酶作用时间 60m i n 时, 淀粉酶活性最高。 结论：通过对绿豆芽生长的不同时期酶活性的研究, 为进一步实现绿豆芽淀粉酶应用提供理论依据。 关键词：绿豆芽; 淀粉酶; 酶活性 1、材料与方法 1. 1　 实验材料 绿豆、 甜玉米为市购。 1. 2　 主要试剂 C u S O 4 · 5H 2 O 、 酒石酸钾钠 、 氢氧化钠、亚铁氰化钾、可溶性淀粉均为分析纯试剂; 次甲基蓝、麦芽糖为生化试剂。 1. 3　 实验方法 1. 3. 1　 绿豆芽的制备方法选择发芽率高、发芽好的绿豆, 最好选择新绿豆. 洗净,挑去混在豆子里的杂质、虫蛀豆、 半粒豆等,以免影响豆芽质量 . 将选好的绿豆加清水浸泡4 h 后,放入器皿中. 并上下翻动,使之均匀. 种壳破裂后 ,将余水淋尽, 后装器皿发芽 ,保持室温 25 ～30 ℃. 当芽长 1 c m时, 温度要保持在 28 ～ 40 ℃之间,相对湿度 90% 为宜. 3～ 4 h 淋 1次水, 水温要低于气温. 气温较低时 ,要淋温水, 每隔 5 ～ 6 h 淋水1次。 2、结果与讨论 2. 1　 结果　 2. 1. 1　绿豆芽萌发不同时期酶活性的情况在试验中采用对比的方法 ,对萌发不同时期的豆芽进行测定, 比较不同时期酶提取液在 40 ℃时水解 1%淀粉溶液 1 h 后产生的还原糖量 , 从而计算出淀粉酶的活性 . 通过对比实验, 得出绿豆芽在生发 84 h 时淀粉酶活性最强 ,其活力值为 43U/g .见表 1 2. 1. 2　 不同因素对绿豆芽酶活性的影响正交试验设计可通过较少的试验次数 ,较快地找到达到最佳试验结果的试验组合, 采用 L8 ( 27）正交表 ,安排酶浓度 ( E ) 、底物浓度 ( S ) 、p H 、温度( T ) 和酶反应时间 ( t ) 5个实验因素,每个因素 2个水平 ,共进行 8次试验组合 . 为确定影响酶活性的最适条件, 第 1次试验取 T= 30, 60 ℃; p H= 3. 0,7. 0; t = 60, 90m i n ; S = 30, 5 g /L , E= 0. 5, 5 g /L ,完成各组酶活性测试. 结果见表 2.由表 2可知 ,第 6组酶活性最高 ,即 T = 60 ℃,p H= 3. 0, S =30 g /L , E= 0. 5 g /L , t = 60 m i n , 并发现各组之间酶活性差异很大.为缩小指标水平间差异 ,在第 6组试验条件附近安排第二次试验 ,仍采用 L8 ( 27) 正交表进行筛选,确定试验条件: T=50, 60 ℃; p H=4. 0, 5. 0;t = 60, 70 m i n ; S= 10, 20 g /L , E=2. 5, 0. 5 g /L , 完成各组酶活性测试. 结果见表 3.由表 3可知,第 3, 6组酶活性较高,其余组较低. 在第 3, 6组试验条件附近再安排第三次正交试验设计, 注意缩小实验因素水平间差距 ,将 E 固定为 1 g /L ,采用 L 9 ( 34) 正交表, 即取 T= 50, 55, 60℃; p H=4. 0, 5. 0, 6. 0; t =60, 70, 80 m i n ; S= 10,15, 20g /L , E= 2. 5, 0. 5g /L ,测得酶活性 ,并进行数据处理,完成各组酶活性测试 . 结果见表 4由表 4可知, 酶活性最高的试验组合是第 7 组,即 T=60 ℃; p H=5. 0; t =60 m i n ; S=20 g /L ,E= 0. 5 g /L . 2. 2　 讨论 2. 2. 1　 发芽时间对绿豆芽中淀粉酶活性的影响本试验从绿豆开始萌发出芽时测定还原糖含量的变化,从而推算淀粉酶活性的变化，在绿豆芽生长周期中，淀粉酶的活性先是由低变高 ,再由高变低. 经过实验得到: 绿豆芽在生发84h时淀粉酶活性最高. 2. 2. 2　 达到最高酶活性的最适条件利用正交试验设计,可以通过较少的试验次数较快地找到绿豆芽淀粉酶活性测试的最适条件 ,由表 6可知 , 当 T=60 ℃, p H=5. 0, S=10 g /L ,E= 0. 5 g /L , t = 60m i n 时酶活性最高, 可以认为这是测试绿豆芽淀粉酶活性的最适条件 ,在绿豆芽淀粉酶活性测试中 , 应围绕此条件安排试验 , 以期得到较好的试验效果 3