DNA重组技术的基本工具(讲课)导论.ppt

你还记得我们吗？ 氢键 磷酸二酯键 DNA聚合酶 限制性内切酶 DNA连接酶 运载体 专题1.基因工程的基本内容 基因工程的概念：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术或基因拼接技术。 别名： 操作环境： 原理： 操作水平： 结果： 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1、简称： 2、分布： ?? 限制酶的识别特点 以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列如：GAA TTCCCC GGGCTT AAGGGG CCC 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”3、特点:一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”④作用：⑤结果： 工具1：限制性核酸内切酶 　 工具3：运载体 1、需要的条件： 　⑴有1~多个限制酶切点 　⑵能在受体细胞中自我复制，或整合到受体细胞的染色体DNA上复制 　⑶有某些标记基因，便于筛选 ⑷对受体细胞无害 2、常用运载体：质粒、λ噬菌体的衍生物或某些动植物病毒 3、质粒2和7能连接形成…ACGT……TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC……CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC……CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG……GACGTC…。 1、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（） 同种限制酶B. 两种限制酶 同种连接酶D. 两种连接酶 4) DNA体外重组的实现 用途 DNA连接酶 DNA聚合酶 寻根问底 (P6) DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 作用 对象 DNA复制 基因重租 4、 DNA连接酶与DNA聚合酶比较 3、类型 ① E · coli DNA 连接酶 来源：大肠杆菌 作用特点：只连接黏性末端 ② T 4 DNA 连接酶 来源： T 4 噬菌体 作用特点：连接黏性末端和平末端 2、作用原理： 催化磷酸二酯键形成 1、作用: ： 工具2： DNA连接酶把DNA片段拼接成新的DNA， 4、 DNA连接酶与DNA聚合酶比较例.限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段:你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？ …CTGCA?? …G① …AC …TG ②CG… GC… ③ …G ? …CTTAA? ④ G…? ACGTC…?? ⑤ …GC …CG ⑥ GT…??? CA…? ⑦ AATTC… G… ⑧ ②和⑦能连接形成 …AC …TG GT…??? CA…? ④和⑧能连接形成 …G ? …CTTAA? AATTC… G…CG… GC… …GC …CG ③和⑥能连接形成 ①和⑤能连接形成 …CTGCA?? …GG…? ACGTC…反向对称 4、DNA连接酶有连接单链DNA的本领吗？迄今为止，所发现的DNA连接酶都不具有连接单链DNA的能力，至于原因，现在还不清楚，也许将来会发现可以连接单链DNA的酶。 思考与探究 P7 1、载体必须具备的条件： ①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； ②具有一至多个限制酶切点，以便与外源基因连接 ③具有某些标记基因，便于进行筛选。 ④对受体细胞无害三、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 2、常用的载体：质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因 3、质粒 本质：小型环状DNA分子。 分布：许多细菌、酵母菌等生物 3、天然的DNA分子可以直接用做基因工程载体吗？为什么？不可以，作为基因工程使用的载体必需满足一定条件,且都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 思考与探究 P7 教材P7思考与探究 1 反馈练习： 2、不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制（） B、有多个限制酶切点C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 3、下列不适合用于基因工程的运载体 是（ ） A、质粒B、噬菌体 C、细菌D、病毒 选我 C 4、下列说法正确的是：（）A、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、重组技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、运载体D、利用运载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆” 选我 D 审题 5、以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析： ①GC… ②AATTC…③ …GC ④ …CTTAA CG…G……CG…G(1)其中①和是