植物生理学实验方案.ppt

三 实验步骤 (1)MDA的提取取0.5g叶片剪碎，加10% TCA 2ml和少量石英砂，研磨，进一步加入3ml TCA充分研磨，匀浆液以4000r/min下离心10min，上清液即为提取液，定容至10ml。 (2)显色反应及测定吸取上清液2ml，加2ml 0.6% TBA，混匀，在沸水浴中煮沸15min，迅速冷却，在4000r/min下离心5min 。取上清液测定532nm和450nm下的OD值。对照以2ml TCA 代替提取液。 四 结果计算 以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，按155mmol-1cm-1消光系数计算MDA含量。 分别计算衰老和对照组的值。 MDA浓度(μmol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450 MDA含量(μmol/g FW)＝ D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的光密度值。 五 注意事项 0.1-0.5％的三氯乙酸对MDA-TBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高； MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降； 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心。 低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为