WesternBlot汇报课稿.ppt

Western Bloting 实验技术 汇报人：杨华永 2013-11-26 目录 Bloting分类 1 实验原理 2 实验方法 3 问题分析 4 几种Blotting ： blotting（印迹法）: 是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 Southern Blot: 1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法。 Northern Blot: 对RNA的印迹分析。 Western Blot: 对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析。 Eastern Blot: 对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析。 Anode - 内槽缓冲液带有负电荷，与凝胶顶部接触 外槽中缓冲液带有正电荷，与凝胶底部接触 Cathode + 带有负电荷的蛋白质从上到下运动（负极到正极），分开 电泳进程可以根据前沿指示剂来确定，等其跑到底部上面1cm左右即可停止电泳 小分子量蛋白跑的比较快. 蛋白根据分子量大小分开 蛋白质带有负电荷，因此电泳时可以从负极向正极移动 标本加入到上样孔中 Western Blot基本原理 Western Blot 基本原理 在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体（NC膜、PVDF膜），然后用这种多肽的特异抗体作为探