基因打靶技术_培训课件.pptVIP

（2） Cre-LoxP介导的姐妹染色体间的重排 哺乳动物细胞中有相当数量的基因是多拷贝的，这些多拷贝的基因在染色体上排列在一起形成基因簇。基因簇中的基因具有相同或相似的功能。用基因打靶的方法研究这些基因的功能必须使这些基因同时产生突变。如果基因簇内的各基因的遗传距离较大，可以分别在每一个拷贝上引入突变，通过子代的杂交获得每个拷贝同时带有突变的个体。但当基因簇内的各基因间的距离很小时，染色体交换的频率非常低，无法通过子代杂交获得各拷贝同时带有突变的个体。用Cre-LoxP系统可以实现这一目的。 具体的实施策略是将两个LoxP序列通过同源重组分别引入到两个基因中去，得到两个分别带有LoxP序列的小鼠品系。两个品系杂交，就会得到在两条姐妹染色体上同时带有LoxP序列的小鼠，再和表达Cre酶的第三个小鼠品系杂交便可获得两个拷贝同时删除的子代。Matsuaka等将编码肾素基因簇内的两个基因ren1和ren2用此方法同时灭活获得了成功。 Cre介导的非同源染色体间的重排人类的许多遗传疾病是由于染色体的易位引起的，应用Cre-LoxP系统成功地建立了相应的动物模型。其原理是，将LoxP序列分别引入到非同源染色体上，在Cre酶的存在下诱导非同源染色体之间的重组。Van Deursen等通过两次连续的基因打靶将两个LoxP序列分别引入到小鼠ES细胞的13号染色体的DEK和2号染色体的Can