第十章 巴比妥及苯并二氮杂卓类镇痛催眠药物的分析.ppt

取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀释制成每1ml中约含5?g的溶液；另取硫喷妥对照品，精密称定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5?g的溶液。照分光光度法，在304nm的波长处分别测定A，根据每支的平均装量计算。每1mg硫喷妥相当于1.091mg的C11H17N2NaO2S。 如注射用硫喷妥钠的含量测定 2. 经提取分离后的紫外分光光度法 根据巴比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其钠盐在水中易溶的特点，本法可消除干扰物质对巴比妥类药物测定的影响。取钠盐加水溶解，加酸酸化，用氯仿提取后再加碱反提。排除辅料或杂质的干扰。 测定方法-取两份相等的供试溶液，分别制成两种不同的化学环境（如在其一中加酸、碱或缓冲液改变溶液的pH，或在其一中加能与供试品发生某种化学反应的试剂），然后将两者分别稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一份置参比池中，于适当波长处，测其吸收度的差值（?A值）。 3. 多组分混合物不经分离的定量方法——计算分光光度法差示分光光度法（?A法） 必要条件 （1）供试品在不同的化学环境中以不同的分子形式存在，它们的吸收光谱有显著的差异。 （2）干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变。 供试品在两种不同的化学环境中分别以x、y 表示，干扰物用 z 表示 3. 定量依据 即，吸收度差值（?A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被消除。 可用对照法或标准曲线法定量 保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰。 特点 应用 （1）于波长240 nm处，测定pH10和pH2两种溶液的吸收度之差 （2）于波长260 nm处，测定pH10和强碱溶液的吸收度之差 差示分光光度法测定血清苯巴比妥浓度 苯巴比妥紫外吸收光谱和差示光谱 Ⅰ .PB 碱液(pH 13)的吸收光谱　Ⅱ .PB 碱液(pH 10)吸收光谱　 Ⅲ .差示光谱 a. PB 碱液(pH 10)的吸收光谱　 b. PB 酸液(pH 2)吸收光谱　 c. 差示光谱 样品制备：各精取空白血清0 .1 ml 于离心管，分别加入不同浓度的苯巴比妥标准溶液使血清浓度分别为5 .0、10 .0、20 .0、40 .0、60 .0、100 .0、140 .0 μg ·ml-1 ，混匀。每份用二氯甲烷萃取两次。向萃取液中加入0 .45 mol·L-1氢氧化钠溶液4 ml，混匀，离心，抽取氢氧化钠层供测定。再取血清0.1mL置10mL具塞试管中，氯仿同法萃取，萃取液中加入NH4Cl溶液为参比，在261nm处测吸收度；ΔA=A1-A2，以浓度为横坐标，ΔA为纵坐标绘制标准曲线 （五）、高效液相色谱 HPLC法同时测定人血清中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的浓度 色谱条件：色谱柱 AgilentZORBAX SB- C18柱( 250 ×4.6mm ,5μm) , 流动相为甲醇∶水∶乙腈(45∶45∶10 ） 流速1.0ml/min, 柱温30℃, 检测波长254nm。 血样处理：取内标溶液100μL，60℃水浴氮气吹干，加200μL待测血清, 加提取液（氯仿：乙酸乙醋=50：50）2ml, 旋涡混合5min, 以4000转/分离心10min, 用吸管吸取上层水层, 弃去。用移液管移取有机相置带盖尖底塑料离心管中, 于60℃水浴中氮气吹干, 用流动相200μL溶解, 取20μL进样测定 方法验证：标准曲线与线性、精密度（RSD 3%) 、方法回收率、提取回收率（大于87%）、稳定性等均符合中国药典的要求 * 固相微萃取 * 固相微萃取方法分为萃取过程和解吸过程两步 萃取过程—具有吸附涂层的萃取纤维暴露在样品中进行萃取，分直接固相微萃取和顶空固相微萃取两种。顶空法可避免基体干扰。 解吸过程—将已完成萃取过程的萃取器针头插入气相色谱气化室内或液相色谱洗脱室，使萃取纤维暴露在高温载气中或流动相中，并使萃取物不断地被解吸下来，进入后序的色谱分析。 * 关键：石英纤维上吸附剂 原则：目标化合物是非极性时选择非极性涂层；目标化合物是极性时选择极性涂层。 第二节 苯并二氮杂卓类药物的分析 药物结构： 硝西泮 阿普唑仑 药物性质 1. 苯并二氮杂卓母核 弱碱性 2. 结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。 3.不同pH条件下离子状态不同，UV不同 1. 沉淀反应 氯氮卓 橙红色