《细叶百合休眠与解除SSH文库构建及其调控基因的初步筛选》.doc

园 艺 学 报 2014，41（7）：1476–1484 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 收稿日期：2013–12–25；修回日期：2014–04–21 基金项目：中央高校基本科研业务费专项资金项目（DL13CA14）；黑龙江省自然科学基金项目（C201137）；黑龙江省博士后科研启动 金项目（LBH-Q09188） * 通信作者 Author for correspondence（E-mail：dlzhyw@126.com） 细叶百合休眠与解除SSH文库构建及其调控基 因的初步筛选 刘 芳1,2，王家艳1，周蕴薇1,* （1东北林业大学园林学院，哈尔滨 150040；2黑龙江八一农垦大学农学院，黑龙江大庆 163319） 摘 要：为了验证百合鳞茎休眠解除过程中基因表达的差异性，以细叶百合休眠鳞茎和休眠解除鳞 茎为材料，利用抑制消减杂交技术构建了百合鳞茎休眠及解除正、反向抑制消减文库。文库富集了差异 基因，消减效率符合要求，插入片段集中于250 ~ 1 000 bp之间。对正、反向文库随机挑选阳性克隆测序， 各获得100个表达序列标签（EST），在NCBI上进行BLASTx分析，并用KOBAS系统将获得的unigene 定位到Pathways中。分析结果表明，休眠文库ESTs功能主要涉及胁迫响应方面，如苯丙氨酸代谢途径、 促分裂素原活化蛋白激酶途径等与休眠有关。休眠解除文库在糖代谢、激素响应及信号转导方面表达量 较高，如亚油酸代谢途径、淀粉及蔗糖代谢途径等参与了休眠解除过程。 关键词：细叶百合；鳞茎；休眠；抑制消减杂交 中图分类号：S 682.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）07-1476-09 Preliminary Screening of Dormancy Regulation Related Genes from SSH Library Constructed Using Dormant and Dormancy Breaking Bulbs of Lilium pumilum LIU Fang1,2，WANG Jia-yan1，and ZHOU Yun-wei1,* （1 College of Landscape Architecture ， Northeast Forestry University ， Harbin 150040， China ；2 College of Agriculture ， Heilongjiang Bayi Agricultural University ， Daqing ， Heilongjiang 163319， China ） Abstract：In order to verify the differences of gene expression in the process of lily bulb dormancy breaking，two SSH-cDNA libraries were constructed using dormant and dormancy breaking bulbs. The forward library contained genes preferentially expressed in dormancy breaking bulbs and the reverse library contained genes preferentially expressed in dormant bulbs. The results showed that differential express genes were enriched effectively in two libraries，and subtraction efficiency reached the demand. Most of the length of inserted fragments was 250–1 000 bp. One hundred positive clones were randomly selected for sequencing from the two libraries. We analyzed ESTs in