2016届高中生物选修3模块易误解的知识点.doc

选修3模块易误解的知识点 整理：从化市第六中学詹金镇 1.基因工程中工具与工具酶 基因工程中的工具包括限制酶、DNA连接酶和载体，而工具酶不包括载体，只有限制酶和DNA连接酶。 限制酶《生物学通报》2013年3期 作者：陈卫东关于限制酶的特异性，常会有以下几个疑问： 一种限制酶只能识别一种碱基序列吗？ 一种限制酶通常只识别一种特定的碱基序列，但是有少数限制酶却可以识别不止一种碱基序列。如：Acc识别的序列是—GTMKAC—（其中M代表A或C，K代表G或T），也就是说可识别4种序列（即—GTATAC—、—GTAGAC—、—GTCTAC—、—GTCGAC—）。Hind能够识别的序列是—GTYRAC—（其中Y代表C或T，R代表A或G），也可以识别多种碱基序列。因此，并不是所有的限制酶都只能识别一种特定的碱基序列。 不同限制酶识别的碱基序列都不同吗？（或一种特定的碱基序列只能被一种限制酶识别吗？） 已知发现的限制酶种类要远超过能够识别的碱基序列，这是因为在很多情况下不同限制酶可以识别同一碱基序列，即存在“同裂酶”（或“同切点酶”、“异源同工酶”）。 虽然不同酶识别的碱基序列相同，但它们的切割位点可能不同。常见的有以下两种情况： 同序同切酶：不同的限制酶识别的碱基序列和切割位置都相同，如Hind与Hinc均识别切割位点—GTYRAC—，Hpa与Hap均识别切割位点—CCGG—，Mob与Sau3A均识别切割位点—GATC—，Aha与Dra均识别切割位点—TTTAAA—。 同序异切酶：这些酶识别序列虽然相同，但切割位置不同，如Kpn和Asp718识别的序列是相同的，均为—GGTACC—，但它们的切割位点不同，Kpn切割的位点为—GGTACC—，Asp718切割的位点则为—GGTACC—。 不同限制酶切出的末端都不能相互连接吗？ 因不同限制酶切出的末端往往不同，所以会有此疑问。对于这个问题，我们也可以分为几种情况进行讨论分析： 如切出的末端是黏性末端： 同序同切酶：虽然限制酶不同，但识别的碱基序列相同，且切点也相同，它们切出的末端是可以相互连接的。 同尾酶：来源不同，识别的碱基序列也不相同，但能切割产生相同末端的限制酶叫同尾酶。所有平末端酶产生的末端均是相同的，但一般不把它作为同尾酶来研究。因此同尾酶一般是指能产生相同粘性末端的限制酶。 同尾酶中，识别序列不同的限制酶，虽然识别的碱基序列不同，但是切开的黏性末端的碱基却能够正好相互配对，在DNA连接酶的作用下能形成重组DNA分子，如：限制酶BamH识别的碱基序列为—GGATCC—，限制酶Bgl识别的碱基序列为—A GATCT—，限制酶Mbo识别的碱基序列为—GATC—，限制酶BamH切开的DNA两条链的黏性末端中没有被配对的碱基是GATC—，限制酶Bgl和限制酶Mbo切开的黏性末端未配对的碱基也都是GATC—。通过比较不难发现这三种限制酶切得的黏性末端是可以相互配对连接的。 类似的情况还有不少，如限制酶Sal与Xho，Hpa与Taq等。 平末端：平末端与黏性末端不同，由于不存在类似于黏性末端碱基互补配对的问题，因此不同的限制酶切开的平末端在DNA连接酶的作用下可以相互连接，形成重组DNA序列。 不同限制酶切开的末端如能重新连接，原有的限制酶是否还能再特异性识别并切开？ 对于这个问题，还是应该分为几种情况去讨论： 同序同切酶：虽然限制酶不同，但识别的碱基序列相同，且切点也相同，因此它们切出的末端重新连接后，又恢复到原有的碱基序列，这些序列还可以被这些同序同切酶再识别。 同尾酶：同尾酶识别的靶序列不相同，但能切割产生相同的黏性末端，因此也可以通过碱基互补配对的形式重组。同尾酶重组后碱基序列与原有两种酶识别的碱基序列均不同，因此原有的限制酶均不再能够识别这种序列，也就不再能够重新切开。如BamH识别的序列是—GGATCC—，Bgl识别的序列是—AGATCT—，而BamH与Bgl切开后的片段重新连接（非自身连接）后的碱基序列是一条链是—AGATCC—，另一条链则为—GGATCT—，已经不是“回文”序列，无论是BamH还是Bgl都无法再识别，所以无法再把其切开。 平末端：同样道理，如两种限制酶切开的都是平末端，而这两种限制酶不是同序同切酶，则两种末端虽然可以重组连接，但连接后的碱基序列与原有限制酶识别的序列不同，原有的限制酶也不再能够识别。 原核生物中的限制性内切酶有何作用？它为什么不剪切自身DNA？生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。原核生物限制性内切酶往往与一种甲基化酶同时成对存在，它们具有相同的底物专一性，具有识别相同碱基序列能力。甲基化酶的甲基供体为S-腺苷甲硫氨酸，