1高效液相色仪.ppt

商品化的Waters ACQUITY UPLC： 双（三乙氧基硅）乙烷在硅胶中形成桥式乙基基团 。这样合成出来的填料在其内部有了更多的“交联结构，耐压性提高。 装填技术 QUITY UPLC使用了更严格的筛分技术，使填料分布很窄，使用了全新筛板及其他色谱柱硬件（柱管及其连接件），在超过20000psi压力下装填。 一个单级（1：100）气动放大泵用压缩氮气把流动相打入一个更大的三级泵（1：1575-1662）（160，000psi) 恒压的进样阀 超高压液相色谱泵 为了降低死体积、减少交叉污染，自动进样器的设计使用了许多新技术，例如针内针样品探头（XYZZ’）、压力辅助进样等等。所谓“针内针”的XYZZ’设计，实际上就是使用液相色谱管路（PEEK材料）充当进样针以减少死体积，而“外针”是一小段硬管，用来扎破样品瓶盖。 自动进样器 快速灵敏（峰宽窄到1秒，高的采样速率采到足够的点对分析峰进行准确重复的积分，20-40点/秒） 检测池体积小、低扩散不至于降低柱效 快速检测器 应用1：2.1×50mm 柱子不同内径填料性能比较 应用2： 8 phenone mix 保留时间重复性相对标准偏差RSD0.3%，8phenone mix全部峰获得基线分离的分析时间为1.2分钟。 展望 填料粒径进一步减小增大柱效，进一步提高灵敏度和通量。（借鉴毛细管高效液相色谱） 提高温度，流动相的粘度和温度成正比，适当的提高温度可进一步降低压力，同时温度升高有利于传质、加快吸附脱附平衡均可以带来柱效的进一步提高。但要注意安全性。 * 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 梯度洗脱的方式： 内梯度: 通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入一台高压泵中混合。 ①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。 ②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。 梯度洗脱的使用： ?④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。 ?③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。 2、进样装置 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约5～30cm），所以柱外展宽（又称柱外效应）较突出，因此对进样技术要求较严。 柱外展宽：色谱柱外的因素所引起的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。柱外展宽可分柱前和柱后展宽。进样系统是引起柱前展宽的主要因素。 在瞬间将样品定量地注入到色谱柱的上端填料中心，形成集中的一点。 进样操作关键： 进样方法： 手动和自动进样。 目前普遍采用的是阀进样。 耐高压的六通阀进样装置结构： 进样阀的部件分别用不锈钢和白金陶瓷材料制成，其耐磨、密封性能好。能耐20MPa高压，可直接在高压下将样品送入柱内。 当进样阀手柄置“取样”位置时，可用特制的平头注射器注入定量的样品(5-20μL不等)，再将进样阀手柄置于“进样”位置，流动相就将样品带进色谱柱，这种进样装置的重现性好。 3、色谱柱 通常采用直型柱管，两端接头处设计成死体积最小，接头处均采用不锈钢或聚四氟乙烯密封圈。 标准填充柱柱管内径为4.6mm或3.9mm、长10-50cm、填料粒度5-10μm时。 一般内径小于2mm的色谱柱称为毛细管径柱；内径在2-5mm范围内的是常规高效液相色谱柱，内径大于5mm的称为半制备柱或制备柱。 灵敏度高 对溶质都有快速响应 适用范围广 响应对流动相流量和温度变化都不敏感 线性范围宽。 四、检测器 色谱柱流出物中样品含量的变化转换为可供观察的信号，通常是转换为电信号，自动记录下来后得到液相色谱图。 作用： 要求： 噪声低、基线漂移小， 灵敏度高， 线性范围宽， 响应快、稳定性好。 检测器评价： 检测器分类： 通用型检测器适应性广泛，但灵敏度低，而且对于流动相也有响应，容易受组成、流速和温度的影响，引起较大的噪声和波动，因此不能在梯度淋洗中使用。