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Part II PCR原理 Part II PCR原理 Part II PCR原理 Part II PCR原理 Part II PCR原理 PCR仪软件操作指南： PCR仪软件操作指南： PCR仪软件操作指南： PCR仪软件操作指南： PCR仪软件操作指南： PCR仪软件操作指南： PCR仪软件操作指南： PCR仪软件操作指南： PCR仪软件操作指南： 关机操作： 实验结束后点击Exit至出现主界面，关闭PCR仪电源开关； 均匀用力将反扣部分抬起，向后平推PCR仪顶盖，取出PCR薄壁管。 向前平推PCR仪顶盖。 普通PCR仪测试题 1.PCR反应所需的主要组分有哪几种？ 2.PCR扩增的基本反应步骤是什么？ 3.9700PCR仪的开机应怎样操作？ 4.9700PCR仪的关机应怎样操作？ 5.9700PCR仪对PCR薄壁管有什么要求？ * * 仪器培训 ——普通PCR仪 Part I 中心仪器简介 Part II PCR原理 Part III普通PCR仪操作规程 Part I 中心仪器简介 荧光定量PCR仪 Rotor gene 3000 普通PCR仪 Gene AMP System 9700 AAAA 蛋白/酶 DNA mRNA 蛋白 中心法则 基因表达 转录水平 翻译水平 基因水平 （Real time） RT-PCR Western blot PCR PCR概念 利用DNA聚合酶、一对引物和四种dNTP，对模板DNA反复多次地进行复制，从而得到大量扩增产物的反应过程，称为PCR。 PCR反应五要素 引物（primer） 酶 （Taq DNA polymerase） dNTP（dATP,dGTP,dCTP,dTTP） Mg2+ （magnesium） 模板 （template） PCR扩增的基本反应步骤 1、变性：加热至95oC左右，使模板DNA变性。 2、退火：降低温度至适合的温度（55oC左右，引物与模板 DNA的互补序列配对结合。 3、延伸：温度在70oC左右时，Taq DNA聚合酶从引物3端催化复制链以5 -3方向延伸。 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温度 （℃） 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1-3步 25-30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA变性 形成2条单链 子链延伸 DNA加倍 Part II PCR原理 PCR原理 PCR的理论方程：Y=x×(1+ Ev)n Y：扩增物数量； X ：起始模板数量； Ev：扩增效率； n：扩增循环数 Part IV 普通PCR仪操作规程 开机操作： 打开PCR仪电源开关； 向后平推PCR仪顶盖，放入PCR薄壁管。 向前平推PCR仪顶盖，并均匀用力将反扣部分压下。 注意： 9700PCR仪必须使用圆头的PCR薄壁管。 Part IV 普通PCR仪操作规程 Gene Amp PCR System 9700 Version 3.05 User:*** Run Creat Edit Util User F1 F1 F2 F3 F4 F5 1 4 7 Enter 2 5 8 0 3 6 9 CE Stop Part IV 普通PCR仪操作规程 Select User Name precql lyf …… Accept New Edit Delete Cancel F1 F1 F2 F3 F4 F5 1 4 7 Enter 2 5 8 0 3 6 9 CE Stop Part IV 普通PCR仪操作规程 User Name___ Use ENTER key to select a character. Accept Backsp Cancel F1 F1 F2 F3 F4 F5 1 4 7 Enter 2 5 8 0 3 6 9 CE Stop abcdefgh ijklmnopq rstuvwxyz Part IV 普通PCR仪操作规程 Method size last used Exp000 qin0 9 03/01/06 Exp001 qin1 9 04/10/06 Start View User Sort Cancel F1 F1 F2 F3 F4 F5 1 4 7 Enter 2 5 8 0 3 6 9 CE Stop Part IV 普通PCR仪操作规程 Start Return F1 F1 F2 F3 F4 F5 1 4 7 Enter 2 5 8 0 3 6 9 CE S