第34讲基因工程.docVIP

第34讲　基因工程 (时间：15分钟) 1.(2015·山东农杆菌侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA插入到植物基因组中。图示为利用农杆菌培育转基因植物的基本流程，请据图作答： (1)剪除Ti质粒的某些片段、替换复制原点O与添加抗生素的抗性基因T的过程①中，需用________处理DNA以防止DNA片段的自身环化，需用________“缝合”双链DNA片段的平末端。 (2)目的基因是指编码蛋白质的结构基因和一些________。由过程②形成的运________识别和结合的部位。 (3)过程③常用________处理使农杆菌成为感受态细胞。在过程⑤⑥前，常采用________技术检测农杆菌和愈伤组织细胞中是否有目的基因及转录产物。 (4)过程④需对植物细胞做冲洗和________处理，然后用________去除细胞壁。 答案　(1)多种限制酶　T4DNA连接酶　(2)具调控作用的因子　RNA聚合酶　(3)Ca2＋CaCl2溶液)　核酸分子杂交(基因探针)　(4)消毒　纤维素酶和果胶酶 2.下图是利用牛乳腺生产人生长激素的流程图，回答相关问题。 (1)图中B过程需要________酶。③是________。含有启动子的是________(填“目的基因Ⅰ”或“目的基因Ⅱ”)。 (2)大量扩增目的基因可采用的方法是________。 (3)④为牛的________，b过程常用的方法为________。图示过程中，为使人生长激素基因在牛乳腺细胞中表达，需将该基因与____________等调控组件重组在一起。 (4)检测人生长激素基因在牛的乳腺细胞中是否转录需用____________法。 答案　(1)逆转录　cDNA文库　目的基因Ⅰ　(2)PCR技术　(3)受精卵　显微注射法　乳腺蛋白基因的启动子(4)分子杂交 3.(2015·江苏单科，32节选)胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一。图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B分别表示β半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白)。请回答下列问题： 图1 图2 (1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是______。 (2)图1中启动子是________酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是______________________________________________。 (3)构建基因表达载体时必需的工具酶有________。 (4)β半乳糖苷酶与胰A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于______。 解析　(1)一个基因表达载体的基本结构应包括启动子、目的基因、终止子、标记基因等，故图1中基因表达载体没有标注出的基本结构是终止子。(2)启动子是一段有特殊结构的DNA片段，是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达，氨苄青霉素抗性基因的作用是作为标记基因，鉴定和筛选含有重组质粒的大肠杆菌。(3)构建重组载体必需的工具酶为限制性DNA连接酶。(4)根据题干信息，β半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上的蛋白酶的切割位点隐藏在内部，可知其意义在于防止胰岛素的A、B链被菌体内的蛋白酶降解，从而保证胰岛素结构的完整性。 答案　(1)终止子　(2)RNA聚合　作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来　(3)限制酶和DNA连接酶　(4)防止胰岛素的A、B 链被菌体内蛋白酶降解 4.(2015·吉林长春调研)某实验室通过基因工程成功培育出抗虫植物，其培育过程大致如图所示，请据图分析回答问题。 (1)抗虫植物的培育过程中，目的基因是____________。目前获取该基因的常用方法有____________和____________两种。 (2)目的基因获取之后，需要构建____________，启动子是______识别和结合的部位，有了它才能驱动目的基因转录。 (3)图示将获取的目的基因导入植物细胞的方法为________法，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞中________上。目的基因是否成功导入植物细胞，可以用____________技术进行检测。如果操作中将该基因导入线粒体DNA中，将来产生的配子中________(填“一定”或“不一定”)含有抗虫基因。 解析　(1)抗虫植物的培育过程中，目的基因是抗虫基因。目前获取该基因的常用方法有从基因文库中获取和利用PCR技术扩增两种。(3)目的基因是否成功导入植物细胞，可以用DNA分子杂交技术进行检测。 答案　(1)抗虫基因　从基因文库中获取　利用PCR技术扩增　(2)基因表达载体　RNA聚合酶　(3)农杆菌转化　染色体的DN