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色谱学基础理论 包括三个基本理论问题： 色谱过程热力学 色谱过程动力学 色谱分离理论 色 谱 过 程 动 力 学 塔板理论 1941年，Martin和Synge阐释了色谱、蒸馏和萃取之间的相似性，将色谱柱设想成由许多液液萃取单元或理论塔板所组成，导出了著名的塔板理论； 基本假设： 1.色谱柱内径和柱内填料填充均匀，色谱柱由若干小段组成，每一小段称为一个理论塔板，塔板一部分为固定相占据，另一部分为流动相占据，且各塔板的流动相体积相等，称为板体积，Vm； 2. 每个塔板内溶质分子在两相间瞬时达到平衡，且纵向分子扩散可忽略；（由于流动相不停移动，分配平衡很难真正实现） 3. 溶质在各塔板上的分配系数是一个常数，与溶质在每个塔板上的量无关； 4. 流动相通过色谱柱不是连续的，而是脉冲式的间歇过程；即每次进入和从一个塔板转移到另一个塔板的流动相体积为Vm； 5. 溶质开始时加在色谱柱零块塔板上。 根据上述假定，在色谱分离过程中，该组分的分布可计算如下： 开始时，若有单位质量，即m=1（例1mg或1μg）的该组分加到第0号塔板上，分配平衡后，由于k=1，即ns=nm故nm=ns=0.5。当一个板体积（lΔV）的流动相以脉动形式进入0号板时，就将流动相中含有nm部分组分顶到1号板上，此时0号板液相（或固相）中ns部分组分及1号板流动相中的nm部分组分，将各自在两相间重新分配。故0号板上所含组分总量为0.5，其中气液（或气固）两相各为0.25而1号板上所含总量同样为0.5．气液（或气固）相亦各为0.25。以后每当一个新的板体积流动相以脉动式进入色谱柱时，上述过程就重复一次(见下表)。 按上述分配过程，对于n=5，k=1，m=1的体系，随着脉动进入柱中板体积流动相的增加，组分洗出浓度随流动相的体积而变化，由塔板理论可建立流出曲线方程（也称塔板理论方程）： W为组分质量，VR为保留体积，n为理论塔板数。 当流动相体积V=VR 时，C值最大，即 色谱柱长：L， 虚拟的塔板间距离：H， 色谱柱的理论塔板数：n， 则三者的关系为： n = L / H 理论塔板数和色谱参数之间的关系为： 理论塔板数 ： 另一计算式： ( W不如W1/2容易测量，因而此式用的较少。) 每米柱长上的理论塔板数，定义为色谱柱效，以N’表示，它是评价色谱柱效能的指标； N’=N/L 从上两式可以看出，色谱峰W越小，柱效能越高，n就越大，而H就越小。因此，n和H是描述柱效能的指标。 通常填充色谱柱的n＞103，H＜1mm。而毛细管柱 n=105--106，H＜0.5mm 由于死时间tm包括在tR中，而实际的tm不参与柱内分配，所计算的n值尽大，H很小，但与实际柱效能相差甚远。所以，提出把tm扣除，采用有效理论塔板数neff和有效塔板高Heff评价柱效能。 塔板理论形象地描述了溶质在色谱柱中的分配平衡和分离过程，导出流出曲线的数学模型，并成功地解释了流出曲线的形状及浓度极大值的位置，还提出了计算和评价柱效的参数。但由于它的某些基本假设并不完全符合柱内实际发生的分离过程，例如，纵向扩能解释造成谱带扩张的原因和影响板高的各种因素，也不能说明为什么在不同流速下可以测得不同的理论塔板数，这就限制了它的应用。 经验式： H＝2dP ( dP＝10μ H＝20μ N＝5万 ) ( dP＝5μ H＝10μ N＝10万 ) dP—柱填料的颗粒直径 柱效的测定和计算： 以反相柱为例，流动相用87％(V/V)的甲醇:水，样品用苯、联苯、萘等，加快记录仪的走纸速度，测出半峰宽W1/2，并由走纸速度换算为与 tR 相同的单位 “分” 或 “秒” ，代入公式，计算出柱效N。 提高柱效的方法： ①固定相填料要均一，颗粒细，装填均匀。 ②流动相粘度低。 ③低流速。 ④升高柱温。 色谱峰区域宽度关系式： 根据塔板理论计算公式可导出： ΔW1/2 = = = 该式表明： 1. 色谱峰区域宽度与溶质保留体积VR成正比， VR又与热力学参数k有关，k又与溶质分子结构、流动