植物生理学实验-课件.pptVIP

生命科学学院 龙云 实验六 叶绿体色素的提取、分离及其理化性质的鉴定 一、层析用叶绿体色素的提取及色素分离 1、原理叶绿体色素各组分的脂溶性和分子量不同，可用层析法于有机溶剂中分离。 2、色素提取新鲜菠菜叶 → 去中脉 → 剪碎 → 烘干 → 研磨成叶粉 → 丙酮提取特点：该提取液不含水分，色素提取较完全，层析效果较好。 3、分离（纸层析法）用毛细管在层析纸上点样2-3次 → 于层析瓶中加入CCl4约10 ml +少量无水Na2SO4 → 层析纸悬挂于层析瓶中 → 层析（至层析剂接近层析纸前沿）注意事项：①层析纸勿接触层析瓶内壁，以防止色素带向瓶壁扩散；②层析瓶不要水洗，否则有拖带现象或拖带更严重。 4、作业将层析结果（层析纸）贴在实验报告中，并标出各色素带的名称。 生命科学学院 龙云 二、叶绿体色素的提取及理化性质的鉴定 1、原理叶绿体色素有特殊的吸收光谱，有荧光现象，可以发生一些基团反应等，这些理化性质可通过一些实验来鉴定。 2、叶绿体色素的提取菠菜叶（去主脉）3 g → 放入研钵 → 丙酮 5 ml + CaCO3, 石英砂少许 → 研磨成匀浆 → 加丙酮15 ml，摇匀 → 过滤到小烧杯中 → 滤液（备用） 3、叶绿体色素理化性质的鉴定与结果分析（p.54-55） ①叶绿素荧光现象观察：取提取液（2 ml）于一支试管中，比较在入射光和反射光下颜色的差异，并解释之。 ②光对叶绿素的破坏作用：2 支试管盛取提取液少许（0.5 ～1 ml）分别置于强光和黑暗下，实验结束时，观察其颜色的变化，并解释之。 ③铜代反应：取提取液少许（1 ml）于一支试管内，逐滴加入浓 HCl至提取液变成褐色，然后加入CuAC2（醋酸铜）晶体少许，并于酒精灯上加热，再观察颜色变化，并解释之。 生命科学学院 龙云 4、黄色素与绿色素的分离在色素丙酮提取液中加入碱（30% KOH甲醇溶液），使叶绿素（本身是一种双羧酸的酯）与碱发生皂化反应，产生的盐能溶于水。加入水相后，黄色素与皂化叶绿素分别溶解于上层有机相和下层无机相，从而分离开来。具体操作按《指导》p.55 步骤 “4” 进行。 5、色素溶液的吸收光谱观察用分光镜按《指导》p.55 步骤 “5” 进行，并列表指出各色素溶液的吸收光谱，据此总结两类色素的吸收光谱。注意：分光镜调好后，不要挪动，以免重调。 6、作业除了对上述观察到的现象进行解释和回答有关问题外，还请回答 p.64 “实验作业” 1，2问题。 * * * * * 重氮和偶氮化合物分子中都含有-NN-官能团，官能团两端都与烃基相连的称为偶氮化合物，只有一端与烃基相连，而另一端与其他基团相连的称为重氮化合物。重氮盐是离子型化合物，具有盐的性质，易溶于水，不溶于一般有机溶剂。重氮盐只在低温的溶液中才能稳定存在，干燥的重氮盐对热和震动都很敏感，易发生爆炸。制备时一般不从溶液中分离出来，直接进行下一步反应。重氮盐的化学性质很活泼，能发生多种反应。偶氮化合物具有各种鲜艳的颜色，多数偶氮化合物可用作染料，称为偶氮染料，它们是染料中品种最多、应用最广的一类合成染料。 叠氮化合物 * * * * * 原色：红、蓝和黄。从理论上讲，所有其他颜色都是由于这三种颜色混合产生的。?间色：绿、紫和橙。这些颜色通过混合原色形成。 复色：橙红、紫红、蓝紫、蓝绿、橙黄和黄绿。这些颜色通过混合上述六种颜色构成。 生命科学学院 龙云 第三次实验 植物组织水势的测定 生命科学学院 龙云 植物组织水势的测定 1、原理植物细胞之间、组织之间，植物与外界环境之间是否发生水分流动以及水分流动的方向由水势差决定。植物组织处于外界溶液中时：①组织水势＜溶液渗透势时，组织吸水，外液浓度提高，密度增大，其小液流在原外液中下降；②组织水势＞溶液渗透势时，组织失水，外液浓度降低，密度减小，其小液流在原外液中上升；③组织水势 溶液渗透势时，水分进出达动态平衡，外液浓度、密度不变，其小液流在原外液中静止不动。 生命科学学院 龙云 2、材料：甘薯、使君子等（叶片）（自选） 3、方法：液体交换法（小液流法）露点微伏压仪法 生命科学学院 龙云 4、实验步骤（1）对照组（原溶液）8 支试管，编号（1-8 ），分别配制0.1～0.8 mol/L 蔗糖溶液各10 ml。（2）试验组（处理液）8 支指形管，编号（1-8 ），对号吸取对照组蔗糖溶液 2 ml叶片打孔取样→叶圆片10 枚/处理 →平衡 30 min（摇动 1 次/5 min） →加入甲烯蓝粉末少许，摇匀→用毛细管吸取染色液→于相同编号对照组液层中央→缓慢放出液滴→观察小液流的流动方向→记录结果→确定与组织水势相等的蔗糖溶液浓度（C） → 计算组织水势 生命科学学院 龙云 注意事项：①打孔取样时，试验组 1～8 号处