植生、生化实验解读-课件.pptVIP

2011年精英教案第五届全国中学生物竞赛培训 植生、生化实验解读课 北京大学生命科学学院 吴光耀 教授 1. 蛋白质测定 1 总N量测定有机N甘氨酸 + H2SO4 —→ 2CO2 + 3SO2 + 4H2O + NH3NH4 2SO4 + 2NaOH —→ 2H2O + Na2SO4 + 2NH3NH4HB4O7+ HCl + 5H2O —→ NH4Cl + 4H3BO3 用酸滴定氨 1. 蛋白质测定 2 双缩脲法测两个以上的肽键碱性环境双缩脲与Cu++生成紫红色化合物 540nm[NH2 2CO] 2 —→NH2-CO-NH-CO-NH2 +NH3 1. 蛋白质测定 3 Folin-酚法是改进的双缩脲法640nm 同时测定了酪氨酸酚基。 1. 蛋白质测定 4 紫外法280nm 比色 1. 蛋白质测定 5 考马斯亮蓝法考马斯蓝G-250可与蛋白结合, 从红色染料转变成蓝色。595nm 测定吸收值 2. 核酸测定 1 RNA 测定—→地衣酚法RNA + HCl —→糠醛核糖转变糠醛 + 3,5-二羟基甲苯地衣酚 —→鲜绿色 670nm比色 2. 核酸测定 2 DNA 测定—→ 二苯胺法DNA + 冰乙酸—→ 羟酮基戊醛脱氧核糖转化羟酮基戊醛 + 二苯胺 —→蓝色 595nm 比色 2. 核酸测定 3 定磷法有机磷 + 高氯酸 —→ 无机磷无机磷 + 磷钼酸—→钼蓝 660nm 比色 2. 核酸测定 4 紫外法260nm 比色 3. 质粒DNA提取和测定 1 扩增质粒 LB + 氨苄青霉素 2 细菌裂解 +碱 质粒DNA出来, 染色体DNA变性 3 沉淀蛋白 +乙酸钾、酚-氯仿 4 纯化质粒DNA 水相质粒DNA用乙醇沉淀+ RNase 溶于Tris缓冲液中 5 260nm测定, 或电泳测定 4. DNA平板电泳 1 制胶 Tris-硼酸缓冲液TBE + 1%琼脂糖 2 加液 TBE液 3 加样 样品 + 花青素 4 电泳 滤光板看DNA移动过程 5. PCR Polymerase chain reaction ---- DNA扩增 1 模板、引物、dNTP、聚合酶、缓冲液、Mg++ 2 过程: 模板双链分开 →结合引物 →新链合成 3 可用毛囊DNA Y染色体DNA, 设计引物,PCR, 男有女无. 6. 层析 1 分配层析纸层析、液相层析 2 吸附层析活性碳、氧化铝 3 交换层析离子交换剂 4 凝胶层析 Sephadex Sepharose Superdex 7. 糖的测定 1 萘酚反应 糖 + 酸 —→ 糠醛+萘酚—→紫环反应 2 蒽酮反应 糖 + 蒽酮+硫酸—→兰绿色 7. 糖的测定 3 间苯二酚反应 酮糖 + 酸 —→ 羟甲基糠醛+间苯二酚 —→鲜红色 4 甲基间苯二酚反应 戊糖 + 酸 —→ 糠醛+地衣酚 —→兰色沉淀己糖