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应用组织化学技术（histochemical technics）,显示组织细胞内的各种化学物质和代谢状态。光镜组织化学技术microscopic histochemical technics所显示的组织化学物质，是呈色反应staining rection，呈色反应的强或弱，表示组织细胞内化学物质含量的多少。酶组织化学enzyme histochemical ，所显示酶的呈色反应的强或弱，也称酶活性反应enzyme active rection。光学显微镜下所见的组织化学呈色反应也称阳性反应positive rection。电子显微镜组织化学技术electron microscopic histochemical technics，是在电镜观察时，所显示的化学物质，呈现出的电子密度ectron dendity高或低即表明所含量的程度，或酶的活性强、弱。光镜和电镜组织化学，均可对所显示的化学物质和酶类，在组织细胞内，进行定性、定量和定位观察。 过氧化物酶 Mcjunkin过氧化物酶显示法 1原理：过氧化物酶催化的反应中有两种底物，即受氢体和供氢体，前者的代表为过氧化氢，后者的代表为联苯胺系列的试剂。细胞内的过氧化物酶氧化联苯胺而呈蓝色或棕色，根据颜色的反应深浅确定酶的含量。 2操作步骤： 新鲜小块组织固定于10%的甲醛溶液8小时； 入70%丙酮1小时，纯丙酮30分钟； 经二甲苯透明，石蜡包埋，切片5 um； 脱蜡经丙酮至水，入过氧化物酶作用液5分钟；联苯胺100 ml80%甲醇25 ml3%过氧化氢2滴用前加1~2倍蒸馏水稀释，保存于暗处。 蒸馏水速洗，入Harris苏木精2分钟，水洗，入依红染20秒钟； 脱水、透明、封片。3结果： 过氧化物酶呈蓝色颗粒 *组织化学技术概述主讲： 谈 新 提人体解剖与组织胚胎学系 一.组织化学的定义组织化学（histochemistry）技术是通过化学或物理反应原理显示组织切片或细胞内某种化学成分，进行定位、定量及其与功能相关的研究。随着科学技术的不断发展，组织化学在近几十年来已经得到了迅速的发展，产生了许多分支，如核酸与蛋白质、蛋白质与氨基酸、脂类与蛋白质、碳水化合物与粘蛋白及粘多糖、无机物组织化学、酶组织化学、电镜组织化学、荧光组织化学、免疫组织化学、同工酶组织化学、定量组织化学、原位杂交组织化学和放射自显影技术等。因此，现代组织化学的概念已经大大的超过了以往的范畴，无论从理论、内容、研究手段、研究范围都比以往更广泛及更深入。 二.组织化学的研究概况 三.组织化学研究的内容 酶类、糖类、脂肪、核酸、蛋白质等酶（Enzyme）酶（Enzyme）是具有催化功能的一种特殊蛋白质，人体的各种机能活动都与酶的活性有密切关系，生物体内的一切新陈代谢活动都是在酶的催化作用下进行的。因此，酶在机体内的各种反应和鉴定手段涉及到各种基础学科，如组织、生理、生化和病理等已成为日益为人们所重视的内容之一。 （一）酶的分类1． 水解酶2． 氧化还原酶3． 转化酶4．连接酶5． 裂解酶6． 异构酶 （二）酶的组织化学反应法1． 偶氮染料法2． 吲哚酚法3． 金属---金属盐法4．氧化-还原反应法5．色素形成法 酶 类 ? 酸性磷酸酶Holt与Bitensky改良磷酸铅法Gomori与McDonedel硫化铅法碱性磷酸酶Gomori-Takamatsu法Gomori改良钙钴法Gomori萘酚磷酸酯法琥珀酸脱氢酶Nachlas硝基蓝四唑法Pearson二甲亚砜法过氧化物酶Graham-Karnovsky法Vitale辣根过氧化物酶酸性磷酸酶（Acid Phosphatase , ACP）广泛 分布于机体组织中，它主要位于溶酶体中，也有少量在 内质网中。巨噬细胞、前列腺、空肠上皮纹状缘、肝、 脾、肾及肾上腺等尤为丰富。 Holt与Bitensky改良磷酸铅法作用原理试剂配制染色方法对照结果作用原理 在酸性PH值的情况下，给切片加入甘油磷酸酯（或任何磷酸单酯），如有酸性磷酸酶，则释放磷酸酯，后者与高浓度的Pb2+结合，形成无色的磷酸铅，经硫化胺（或硫化氢）作用，磷酸铅转变为黑色硫化铅： 甘油磷酸酯磷酸酯+铅磷酸铅硫化铅 酸性磷酸酶 试剂配制 ①孵育液 在400ml0.05M醋酸缓冲液（PH值5.0）中加入0.53g硝酸铅及40ml3%的β-甘油磷酸钠溶液，在37℃放置24h产生一些沉淀物，冷却后过滤，过滤后立即使用。 ②硫化氢液 用浓硫酸作用于硫化锌或硫化铁，所产生的硫化氢气体用通过很稀的盐酸洗去气体中的杂质后，再通过50ml蒸馏水中，每分钟通过120个气泡的速度10min即可。 染色方法 ①未固定的新鲜组织用恒冷切片机切片； ②在孵育液中，37℃孵育切片，不同的组织孵育的时