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实验一 显微镜的构造、性能和使用方法(Ⅰ) 环境中微生物的检测(Ⅱ) 学时：2(伍国明) 一、实验目的 1.掌握显微镜的构造、性能和使用方法，重点掌握普通光学显微镜油镜的使用。 2.了解和利用普通光学显微镜油镜对细菌、放线菌进行个体形态观察。 3.观察并比较不同来源的微生物生长的数量和类型。 二、实验原理 1.油镜使用香柏油原理：1.增加照明亮度 油镜的放大倍数可达100Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油镜（通常用香柏游，其折射率n=1.52）。 2.增加显微镜的分辨率 显微镜的分辨率或分辨力(resolutionorresolvingpower)是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：（公式P16）式中λ=光波波长；NA=物镜的数值孔径值。 光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（0.4--0.7μm），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为：NA=n×sinα 式中α为光线最大入射角的半数。它取决于物镜的直径和焦距，一般来说在实际应用中最大只能达到120O，而n为介质折射率。由于香柏油的折射率（1.52）比空气及水的折射率（分别为1.0和1.33）要高，因此以香柏油作为镜头于玻片之间介质的油镜所能达到的数值孔径值（NA一般在1.2~1.4）要高于低倍镜、高倍镜等干镜（NA都低于1.0）。若以可见光的平均波长0.55μm来计算，数值孔径通常在0.65左右的高倍镜只能分辨出距离不小于0.4μm的物体，而油镜的分辨率却可达到0.2μm左右。 2.油镜使用方法 ⑴调整光亮（大光圈、高聚光镜）→玻片滴油→调整载物台→低倍镜→高倍镜→油镜观察→清洗油镜头 ⑵调整光亮（大光圈、高聚光镜）→玻片滴油→调整载物台→油镜观察→清洗油镜头 三、实验步骤 1.油镜观察：（1）上升聚光器，全开虹彩光圈。（2）用粗调节轮提起镜筒或下降载物台，转动转换器将油镜转至镜筒正下方。在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。右手顺时针方向慢慢转动粗调节轮使镜筒下降或载物台上升，与此同时，从显微镜的侧面观察使油镜浸入油中，直到几乎与标本接触时为止。注意不要压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头。（3）从接目镜内观察，进一步调节光线，使光线明亮，再用粗调节轮将镜筒徐徐上升或将载物台徐徐下降，直到视野内出现物像为止，然后用细调节轮校正焦距。如油镜已离开油面而仍未见物象，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作至物象看清为止。 2.环境中微生物的检测 熔化培养基→倒平板→冷却→无菌接种（头发、牙垢、指甲、手指触摸、暴露空气5’、其它） 四、实验结果； 1.选绘四种细菌、放线菌个体形态图. 2.每人上传2个本人拍照的细菌、放线菌个体形态图. 五、讨论分析（完成指定的思考题和作业题） 1.简述利用显微镜油镜观察细菌、放线菌个体形态图的方法 参考答案： .显微镜是光学精密仪器，在使用时要特别小心，使用前要熟悉显微镜的结构和性能，检查各总零件是否完好无损。镜身有无灰尘，镜头是否清洁，做好必要的清洁和调整工作。 2.拿取显微镜必须一只手拿着镜臂，一只手托着镜座，并保持镜身的上下垂直，应避免震动，轻放台上。切不可一只手提起，以防显微镜、反光镜功目镜坠落。 3.使用前应将镜身擦拭一遍、用擦镜纸将镜头擦净（切不可用手指擦抹）。若遇到镜台或镜头上有干香柏油，可用擦镜纸沾取少量二甲苯将其擦去。 4.使用时如发现显微镜操作不灵活或有损坏，不要擅自拆卸修理，应立即报告指导教师处理。 5.注意保护镜头，切不可压碎标本被片，损坏镜头 6.显微镜使用完毕，应登记显微镜使用卡经指导教师检查后放回镜箱。 六、改进实验建议。 个人主页: 4/caiwsw/spwswzdkc/zdkc/content/grjs/grjs.htm#wgm1 Email:fswuguoming@ QQ：916664536 实验二 细菌的染色与形态结构的观察 一、实验目的 着重细菌的染色观察，在掌握细菌染色观察的基础上，了解细菌形态结构的观察方法；初步认识细菌的形态特征，巩固课堂知识，增强感性认识。 二、实验原理 1.简单染色原理 常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷)，因此碱性染