21 生物学实验--琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白.docVIP

琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白 【目的】 1. 掌握琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白的实验原理和操作方法。 2. 熟悉血清脂蛋白改变在临床上的重要意义。 【原理】 电泳是指带电颗粒在电场的作用下，向着与其自身所带电荷相反的电极移动的现象。根据电泳支持物的不同，血清脂蛋白电泳可分为滤纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳四类。由于各种脂蛋白所含载脂蛋白和脂类的种类及数量不同，分子量大小相差较大，并且在一定 pH 值溶液中所带电荷量不同，电泳移动的速度必然有差别，因此，通过电泳可以将不同种类的血清脂蛋白彼此分离。 血清脂蛋白经苏丹黑 B 预染后，以琼脂糖为载体，在 pH 8.6 巴比妥缓冲液中进行电泳，可将脂蛋白分成不同的区带（图 3-9 ）。正常人空腹状态下，血清脂蛋白电泳后可出现三条区带，从阳极到阴极依次为 α- 脂蛋白带、前 β- 脂蛋白带及 β- 脂蛋白带。点样槽处不会出现乳糜微粒，有时前 β- 脂蛋白也显示不出来。区带的宽窄及颜色的深浅粗略地反应了各种脂蛋白的量。 另外，可以将已烘干的凝胶片直接放到吸光度扫描仪上，通过扫描得出各种脂蛋白的百分比含量。或者，将电泳后凝胶板上各区带切下，比色定量分析出各种脂蛋白的百分比含量。 图 3-9 预染血清脂蛋白电泳图谱 【器材】 1 ．电泳仪 2 ．恒温水浴箱 3 ．离心机 4 ．