2.1微生物的验室培养.pptVIP

* 到目前为止， 几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关 课题1 微生物的实验室培养 19世纪中期，关系到法国经济命脉的酿造业曾一 度遭受毁灭性的打击。在生产过程中， 出现了葡 萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究，法国科 学家巴斯德发现导致生产失败的根源在于发酵 物中混入了杂菌。 由此人们意识到保持培养物纯净的重要性。 防止杂菌入侵，获得纯净的培养物， 是研究和应 用微生物的前提。一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。 一、基础知识： （一）培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 培养基就是微生物生存的环境和营养物质 液体培养基：（一般用锥形瓶盛装;常用于工业生产） 固体培养基：（一般用试管或培养皿盛装，在液体培养基的基础上再添加凝固剂琼脂;用于微生物的分离、计数、鉴定） 半固体培养基:（加少量琼脂，用于观察微生物的运动） 1.培养基的种类 (1)按物理状态分： 固体培养基 液体培养基 (2)按功能分： 选择培养基：加入某种化学物质，从众多微生物中分离出所需微生物 鉴别培养基：加入某种试剂，鉴别不同种类的微生物 2.培养基的基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 牛肉膏、糖、脂肪酸 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源 无机氮源： 有机氮源： NH4＋、NO3-、N2 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等 讨论1：回忆有关活细胞中元素组成的知识，想一想为什么大多数培养基都含有这四类物质？ 组成生物体最基本的元素是: C、H、O、N 注：含CHON的如蛋白质，可以作为异养微生物的碳源、氮源和能源。 1000mL牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 培养基组分 提供的主要营养 牛肉膏 5.0g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素 蛋白胨 10.0g 氮源、维生素、碳源 NaCl 5.0g 无机盐 H2O 定容至1000ml 氢元素、氧元素 除此之外，还需要满足微生物生长对特殊营养物质（例如:生长因子，即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物，如维生素、某些氨基酸等） pH以及氧气等要求。 加入青霉素的培养基: 不加氮源的无氮培养基: 不加含碳有机物的无碳培养基: 几种选择培养基举例： 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离固氮菌 分离自养型微生物 唯一碳源为纤维素的培养基 分解纤维素的细菌 3. 培养基配制原则 ⑴目的明确： ⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当 ⑶适宜的pH值： 有机碳源 异养型： 根据微生物的种类、培养目的选择原料 自养型： 不加碳源 加入缓冲剂 细菌中性或微碱，真菌酸性 （CO2碳源） 生产 科研 固氮型：不加氮源 （二）无菌技术 无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。 （1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 （2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 （3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 （4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 无菌技术，主要包括以下几个方面： 耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时 接种环、接种针等 金属用具 70~75℃、30min 80℃、15min 100℃、5~6min 消毒 灭菌 定义 方法 较为温和理化方法， 杀死部分有害菌体 （不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法， 杀死所有微生物 （包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 紫外线 灼烧灭菌 干热灭菌 酒精、氯气、石炭酸等 高压蒸汽灭菌 培养基， 100KPa、 121℃、15～30min 消毒与灭菌： 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时