口腔微生物分子生物学2.pptVIP

第三节 牙发生的分子机制（了解） 人的牙由胚胎时期的牙胚发育而来。 一、釉质形成的分子机制 牙本质开始形成时，介于成牙本质细胞和成秞细胞间的基板开始破裂，一旦牙本质发生矿化，成秞细胞就开始并分泌釉基质。 釉质的发生与成熟可分为 釉质分泌期 釉质成熟期 （二）釉基质的特征 （三）釉基质蛋白在釉质发育中的作用 二、牙本质形成的分子机制 （一）牙本质细胞外基质的成分及分类 （二）胶原 （三）主要存在于牙本质中的非胶原蛋白 （四）主要存在于矿化组织中的蛋白 （五）多组织非特异性蛋白 第四节 分子生物学在口腔致病菌研究中的应用 DNA重组技术的应用 协助确定致病菌及其毒力因子 了解致病基因的结构、排列与表达 协助疾病的早期诊断 通过基因工程可大规模合成来源有限的药用蛋白质或研制基因工程疫苗 应用基因疗法治疗基因缺陷型疾病 一、变形链球菌属致龋毒力因子 变链致龋具备的主要特征 能牢固地黏附至牙面 能利用外源性糖类（特别是蔗糖）迅速产生乳酸 能利用外源性糖类产生细胞内多糖，在外源性糖缺乏时利用这些细胞内多糖产酸 能在酸性环境中生存并继续产酸（pH5以下），即具有较强的耐酸性。 （一）葡萄糖基转移酶 3种： GTFI(合成非水溶性葡聚糖) GTFS（合成水溶性葡聚糖） GTFSI（合成水溶性和非水溶性葡聚糖） 控制他们的基因是 gtfB,gtfD,gtfC 表P116—表3-5 不同的菌种可以具有不同数量及不同性质的GTF gtf基因间存在着一定的差异。 gtf基因具有共同特点 基因长约4000~5000碱基对，编码1500个氨基酸 信号肽（在GTF的氨基端有一段30个氨基酸长的信号肽），使GTF在细胞内合成后分泌至细胞外。 易变段（信号肽之后200~300个氨基酸段） 保守段（1000多个氨基酸组成的长段） GTF在功能上分为三段： GTF酶催化功能段（信号肽之后的一段氨基酸） 结合底物（蔗糖）、裂解蔗糖并利用其中的葡萄糖基合成葡萄糖。 葡聚糖结合区（羧基端） 该区的肽链可以和葡聚糖结合，有助于变链菌的黏附。（原因：口腔中的游离的变链菌可借助表面的GTF结合至牙菌斑内的变链菌或其他细菌所产生的葡聚糖上。） A序列的重复 在葡聚糖结合区内，gtf基因的DNA序列呈现多个重复。 在维持完整GTF酶活力上起重要作用。 至少有A序列的三次重复才可能具有结合葡聚糖的能力 至少有A序列的两次重复才能维持GTFI合成能力 （二）其他介导变链黏附的因子 葡聚糖结合蛋白（GBP） 能与葡聚糖结合，但不具有裂解蔗糖及合成葡聚糖的能力。 理论上：变链菌表面的GBP能协助变链菌黏附于牙面的葡聚糖上。 实验证明：缺乏GBP的变链菌在蔗糖存在下的粘附力及致龋力均无明显变化。（原因：GTF也具备葡聚糖结合能力，可以补偿GBP的而缺乏） 果糖基转移酶和果聚糖酶（FTF） 能裂解蔗糖并利用其中的果糖基合成果聚糖。 变链菌表面有果聚酶，在外源性糖缺乏时能裂解牙菌斑中的果聚糖，为细菌的代谢提供营养。可能与致龋有关。 表面蛋白（Ⅰ或Ⅱ或称PAC或SPA） 表面蛋白呈疏水性，有利于细菌与牙面或菌斑之间形成的疏水键结合。 具有黏结素的作用，能特异性的识别牙菌斑中的受体并与之结合，故在变链菌对牙面的早期黏附中起重要作用。 （三）变链菌致龋的毒力因子 基因 pac gtfB gtfC gtfD ftf fruglg 二、核酸杂交法检测牙周病相关细菌 （一）概述 牙龈卟啉菌 中间型拟杆菌 伴放线放线杆菌 具核梭形杆菌 直肠沃廉菌 埃氏腐蚀菌等 厌氧菌 （二）探针 探针的类型 全基因组探针 克隆DNA片段探针 特定探针 寡核苷酸探针 （三）探针的验证 特异性验证 敏感性验证 （四）核酸杂交的应用及临床意义 加速牙周病致病菌的研究与监测 协助早期诊治及预后判断 根据所查损害区的致病菌情况（种属、数量等）作为判断牙周病是否处于进展期的重要指标。 根据病损区可疑致病菌的抑制或减少情况，监测疗效，便于及时调整治疗方案。 三、基于16SrRNA基因分析的口腔微生物分类与鉴定 （一）概述 培养的微生物鉴定方法在实际操作中存在一些不足之处 成本较高 生长缓慢的细菌培养时间较长 对专性厌氧菌的敏感性较低 特异性不高 在微生物进化过程中出现趋同和趋异现象 （二）原理和方法 核糖体 rRNA 基因存在于所有细胞型生物中，是细胞中最古老的分子之一，在蛋白质合成中起重要作用，具有功能和进化的同源性。 rRNA基因是微生物基因组中最重要而稳定的组成部分，对其序列的分析能够反映微生物的进化关系。 rRNA基因大小适中，在微生物的进化过程中保持相对稳定的生物学功能和保守的碱基排列顺序，同时存在着与进化相一致的突变率，因此出现了进化速率不同的保守区和可变区。可用于亲缘关系较远和较近的物种之间的比较。 广泛存在于原核