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报告内容 微透析取样的基本原理 透析针插入生物组织或生物母体,灌流液由注射器推入膜内套管,透析膜孔径允许小分子自由扩散通过而阻止蛋白质等大分子通过. 活体微透析技术原理示意图 基本微透析系统 微透析探针的种类 微透析技术(MD)特点 透析针透析效率 影响EE的因素： 温度 灌注速度 透析膜的物理及化学性质 探针的形状 被分析对象的性质 被分析对象在生物介质中的扩散速度。 微透析探针活体校正方法 外推至零流速法 零净通量法 极慢流速法 反透析（内标法） 释放量法 微透析(MD)与质谱(MS) 的联接 微透析作为进样部分 MD 与MS联用的特点 样品量少、灵敏度高, 能够提供未知化合物的结构 微透析取样和多级质谱装置流程图 毛细管液相-多级质谱与微透析采样联用示意图 微透析作为ESI-MS 除盐接口 在线微透析液相色谱电喷雾质谱偶联装置示意图 等电电点聚焦-微透析-质谱联用 树脂玻璃微透析示意图 高效液相离子色谱在线微透析质谱联用示意图 温度对微透析除盐效果的影响 50 ℃ 时的除盐效果 质谱-微透析联用在生物学中的应用 研究药物代谢和药物动力学 * * 质谱与微透析应用进展 报告 人: 王 畅 指导教师: 许国旺 微透析取样的基本原理 微透析系统的组成 微透析探针的设计及种类 微透析技术的定量问题 质谱与微透析体系的联接 质谱-微透析联用在生物学中的应用 A— 灌注液(在透析针内); B—注射泵; C—连接管; D—样品收集; E—微透析探针 活体(In vivo)、实时（In time）、在线（On line） 时间分辨性 空间分辨性 提供游离态小分子化合物,对药物研究有重要意义 样品因不含蛋白质、酶等大分子物质，可不经预处理直接用于测定 不足: 回收率低 ,通常在 15%左右 透析效率(EE)：表示微透析液中待测化合物与其在样品基质中浓度的关系 EE= (Cdout–Cin)/(Cb–Cin) = 1-exp[-1/Qd(Rd+Rm+Rext)] Cdout, Cin, Cb分别为样品在透析液、注射液和生物过程中的分析浓度； Qd为注射速度；Rd, Rm, Rext分别由透析液， 透析膜和生物反应溶液引起的对扩散的阻力。 微透析作为进样部分 微透析作为ESI-MS除盐接口 反相柱子的2-D色谱 体系复杂,操作耗时 离子捕获 由于在离子捕获模式下离子很快趋向饱和,不适应延时操作 微透析 在线透析可以很好使生物质谱与液相色谱柱偶联,而且具有高通量的特征 在室温 25mM NaCl 100mM NaCl 50mM NaCl 25mM NaCl 50mM NaCl 100mM NaCl 研究颅脑的分子生物化学机理 检测乳酸含量变化来分析代谢性功能障碍 检测神经递质与兴奋性氨基酸的变化为神经科学提供 理论依据 氧自由基在原发性和继发性脑损伤的作用