生物化学与分子生物学技术课件.pptVIP

脂质体法 重组体 脂质体 受体细胞 重组体克隆的筛选与鉴定 转化后的克隆群体： 1遗传检测法 1）抗药性标志的选择 pBR322 Amp Tet 插入片段 Amp平板 Tet平板 宿主细胞 ori 抗Amp 宿主细菌 含Amp培养基 多种酶切口 多克隆位点 限制性内切酶 单一酶切口 多克隆位点 ori 复制起始点 遗传标记 Amp polylinker 基因载体 选择标记 ori 多克隆位点 转录终止区RBS P O表达型质粒载体图噬菌体载体 50kb ?+ LA RA LA RA EcoR Ⅰ EcoR Ⅰ lacZ cI Am Neo P BamHⅠ HindⅢ ori BamHⅠ HindⅢ 限制性内切酶酶切 酶切 限制性内切核酸酶在特异位点上切割DNA分子分三类，常用为Ⅱ类酶识别序列呈回文对称命名：酶来源的生物名称缩写属名-种名-株名-发现次序5’- GAATTC-3’ 3’- CTTAAG -5’ 5’- GTTAAC-3’ 3’- CAATTG -5’ EcoRⅠ的识别序列 HaeⅠ的识别序列 5’NNNNNNNGAATTCNNNNNNNN3’ 3’NNNNNNNCTTAAGNNNNNNNN5’ 5’NNNNNG3’NNNNNCTTAAp EcoRⅠ的识别序列和酶切切口（粘端） pAATTCNNNNNN3GNNNNNN5’ 5’NNNNNNGTTAACN