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免疫学实验课件 生化与免疫学实验室 中性粒细胞的吞噬作用 【实验目的】 　　1.熟悉中性粒细胞吞噬实验的原理和方法。 　　2.通过本实验理解机体的非特异性免疫机制。 【实验原理】 　　中性粒细胞具有吞噬杀菌功能，当与颗粒性物质（如葡萄球菌等）混合孵育一定时间后，颗粒性物质被吞噬杀灭，根据吞噬率、吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。 【实验材料】 　　1.表皮（白色）葡萄球菌菌液（浓度6~10亿/ml)。 　　2.肝素溶液（25U/ml）；甲醇，碱性美蓝（或瑞氏）染液。 　　3.血红蛋白吸管，凹玻片，载玻片，采血针，微量加样器，湿盒，显微镜，恒温培养箱，75%酒精，棉签，香柏油，二甲苯等。 【实验方法】 　　1、用微量加样器，吸取肝素20ul加入洁净凹玻片凹孔内。 　　2、用酒精棉签消毒手指后，刺破皮肤，以血红蛋白吸管取血40ul，立即放入盛有肝素的凹玻片凹孔内，并充分混匀。 　　3、用微量加样器取葡萄球菌菌液20ul加入上述凹玻片凹孔内，充分混匀。 　　4、将凹玻片置于湿盒内，30℃温箱中30min，其间每隔10min摇匀一次。 　　5、取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻片推成薄血片，待干。 　　6、滴加甲醇固定3min，水洗。 　　7、加碱性美蓝染色1~2min，水洗，印干。 　　8、置油镜下观察吞噬和未吞噬的白细胞并计数。 【实验结果】 　　　　　　　　 【实验思考】 　　1、在吞噬细胞中发现细菌时，如何区别吞噬的细菌和粘附在吞噬细胞表面的细菌？ 　　2、简述机体非特异性免疫的概念及特点。 凝集反应 【实验目的】 　　1．了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。 　　2．掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的实验方法和结果分析。 【概述】 　　在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。凝集反应是一种定性的检测方法，也可以进行半定量检测。凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应。由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍被广泛应用。 一、直接凝集反应 　　细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应 。常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。 玻片凝集试验——ABO血型鉴定 　　玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便，快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。 【实验原理】 　　人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。 　　　　　　ABO血型的划分 【实验材料】 　　1．ABO血型鉴定试剂盒　内含抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。 　　2．一次性采血针1枚、洁净玻片2块、75％酒精、灭菌棉签。 　　3．84消毒液 3．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一载玻片一端取适量血液加入抗抗A分型试剂，并混匀；用另一端再取适量血液加入抗抗B分型试剂，并混匀。用干棉签止血。 　　4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。 二、间接凝集反应 　　将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。 　　根据载体的不同可将间接凝集反应分为：间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验（及间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协同凝集试验等。 间接凝集抑制试验——妊娠试验 【实验原理】 　　可溶性抗原致敏的乳胶颗粒与相应抗体作用可使乳胶颗粒凝集，此为间接乳胶凝集试验。若使抗体先与可溶性抗原作用，再加入该抗原致敏的乳胶颗粒，则乳胶凝集被抑制，此为间接乳胶凝集抑制试验。 　　孕妇尿中绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。HCG与抗HCG抗体先作用后，再加入HCG致敏的乳胶颗粒，不出现凝集反应，此为妊娠试验阳性；非孕妇尿中HCG含量不足以消耗掉抗HCG抗体，抗体与后加入的HCG致敏乳胶结合呈现凝集现象，则妊娠试验阴性。 【实验材料】 　　1．妊娠诊断试剂盒：内含抗血清（抗HCG）、乳胶抗原（HCG致敏） 　各一支 　　2．待检尿、孕妇尿、正常尿。 　　3．有格玻片和毛细吸管等。 【实验方法】 　　1．在玻片的第1、第2和第3格内分别加1滴正常尿、待检尿及孕妇尿。