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血小板相关抗体检测的可靠性研究来源漯河医学高等专科学校第二附属医院检验科 462300摘要：目的 探讨常用的酶联免疫吸附试验（ELISA）法对检测血小板相关抗体的可靠性，建立较规范的不同ELISA试剂盒可适用的技术原则。 方法 选择常用的ELISA血小板相关抗体试剂盒，对30例特发性血小板减少性紫癜（ITP）、10例慢活肝、5例自身免疫疾病、6例肺炎及其他感染性疾病患者和20名健康志愿者作血小板相关抗体（PAIgG）检测。 结果 单克隆抗体特异性血小板抗原固相化法（MAIPA）检测结果作参比。不同ELISA试剂盒血小板相关抗体检测的阳性检出率均存在统计学差异。结论 ELISA检测原则应考虑4℃的血小板分离洗涤条件，用Nonidet P-40溶解血小板，且尽可能避免使用草酸铵。可考虑用MAIPA法替代ELISA法。关键词： 血小板相关抗体; 特发性血小板减少性紫癜血小板相关抗体检测目前仍是免疫性血小板减少症，尤其是特发性血小板减少性紫癜（ITP）的主要诊断指标。自从1981年Gudino和Miller建立酶联免疫吸附试验（ELISA）法血小板相关抗体检测以来，ITP血小板相关抗体检测的总阳性率达到90%以上，并且相关抗体的滴度和阳性率与ITP疗效存在较高的相关性，成为判断ITP预后的重要指标。但由于ELISA法接受的是血小板溶解液标本，受到血小板内免疫球蛋白和血浆中免疫球蛋白浓度的影响，可检出较多的非特异性抗体。材料和方法一、 研究对象1.ITP患者 均按张之南“血液病诊疗标准”确诊，男10例，女20例，中位年龄28岁。其中慢性ITP 20例，急性ITP 10例。2.其他疾病患者 慢性活动性肝炎患者10例，自身免疫性疾病患者5例，肺炎及其他感染性疾病患者6例。3.健康对照者 为瑞金医院体检正常者，男、女性各10例，平均年龄32岁。二、 主要试剂1.血小板相关抗体ELISA检测试剂盒（以PAlgG为例） 选用苏州医学院止血血栓研究室、太阳生物技术公司，捷门生物技术公司、Diagnostic等公司的产品，并按产品说明书上的要求操作。2.单克隆抗体 C.Kaplan教授提供，以单克隆抗体特异性血小板抗原固相化法（MAIPA）检测，并以此与ELISA检测结果比较。三、 主要方法1.标本准备 所有血标本以EDTA-Na2为抗凝剂，全血9∶1抗凝后30 min内分离血小板。获得的血小板经洗涤、调整浓度后按各血小板相关抗体检测试剂盒要求测定。2.特定检测条件 血小板分离、洗涤在ELISA方法检测过程中分室温（22℃～25℃）及4℃两个环境和是否以草酸铵作红细胞处理分别进行，并比较不同试剂盒和同试剂盒不同温度的结果。3.血小板膜溶解试剂 在ELISA方法检测中分Triton X-100和Nonidet P-40两种分别进行，并比较不同试剂盒和同试剂盒不同溶解剂的结果。4.对不同患者血小板表面相关抗体检测 ELISA不同条件检测结果以超过各自商品参考值2个s作为阳性检出标准，用x2分析各自的阳性率差异。并与MAIPA方法检出阳性率对照。结 果ELISA法的各试剂盒和MAIPA检测患者及健康对照者血小板表面相关抗体结果见表1，2。表1 血小板（Triton X-100溶解）表面相关抗体检测（阳性率，%）组别（n） A试剂盒 B试剂盒 C试剂盒 D试剂盒s4℃+ 4℃- 室温+ 室温- 4℃+ 4℃- 室温+ 室温- 4℃+ 4℃- 室温+ 室温- 4℃+ 4℃- 室温+ 室温-急性ITP（10） 80 80 70 70 70 70 60 70 80 80 80 60 50 60 40 50慢性ITP（20） 50 50 45 40 30 40 30 35 25 15 20 15 45 45 30 40感染性疾病（6） 67 83 50 67 83 83 83 50 100 100 67 67 33 50 33 33慢活肝（10） 80 80 80 80 90 60 80 80 60 80 70 70 70 60 60 70免疫性疾病（5） 80 80 60 80 60 80 80 100 80 80 100 80 40 60 60 40体检健康（20） 20 13 13 10 13 16.7 6.7 23.3 20 13 23.3 23.3 13 13 20 10注：“+”为使用草酸铵处理红细胞;“-”未用草酸铵表2 血小板（Nonidet P-40溶解）表面相关抗体检测（阳性率，%）组 别（n） MAIPA A试剂盒 B试剂盒 C试剂盒 D试剂盒4℃+ 4℃- 室温+ 室温- 4℃+ 4℃- 室温+ 室温- 4℃+ 4℃- 室温+ 室温- 4℃+ 4℃- 室温+ 室温-急性ITP（10） 100 90 90 70 70 70 80 70 70