实验一 细胞的形态观察和大小测量2幻灯片.ppt

实验一 细胞形态结构的观察、细胞 计数和显微测量 实验目的 1、进一步熟悉显微镜的使用方法； 2、熟悉动植物、人体细胞的基本结构； 3、掌握显微测微的原理和方法，通过测微对细胞的大小有所了解； 4、学习细胞计数方法； 5、掌握临时装片、涂片的制作方法。 实验原理 细胞是生命活动的基本结构和功能单位，其形态与功能相适应，种类繁多，形态各异，有球形、椭圆形、扁平形、长梭形、星形等。虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点，都是由细胞膜（动物），细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。一般光学显微镜分辨率为0.2um，细胞中的线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等细胞器长度或直径大于0.2um，一般经过一定固定染色处理后，借助显微镜可以观察细胞及其内部结构。 实验原理 不同的组织细胞不仅形态上有差异，大小也往往各不相同。有机体的每种细胞都有其特定的尺寸和形态，这与它们发挥特定的功能有关，而一旦细胞不能保持固有形态，其功能就会受到损害，从而会给有机体带来一系列问题。 利用显微镜附带的测微尺可以对观察到的细胞或其结构进行长度测量，从而对其体积进行计算。 实验原理 细胞计数法是细胞培养过程中的一项基本技术，只有控制合适的细胞密度才能确保细胞顺利生长，同时在研究细胞生长状态，绘制生长曲线等实验中也会用到细胞计数。细胞计数的原理较简单，只要从需要计数的细胞悬液中取一定体积的悬液，稀释后在显微镜下利用细胞计数板进行计数，即可换算出原始细胞悬液中细胞的密度以及细胞总数。 洋葱鳞茎表皮细胞 人口腔上皮细胞 人的红细胞 神经细胞 酵母菌细胞 实验用品 1、器材：普通光学显微镜，测微尺，细胞计数板，刀片，剪刀，小镊子，玻片，擦镜纸； 2、材料：洋葱，人口腔上皮细胞，鸡血细胞悬液； 3、试剂：碘液，瑞特染液 实验步骤 （一）洋葱鳞茎表皮细胞的观察 1.临时装片的制备：在载玻片中央滴一滴1%的碘液，剥取洋葱鳞茎表皮，用小镊子撕取内表皮，用剪刀剪取0.5*0.5mm2大小平铺在碘液中，用镊子夹取一块盖玻片，将一条边缘接触碘液，然后缓缓盖在液滴上，防止产生气泡，轻压盖片，用吸水纸吸去挤出的碘液。 2.将制备好的装片放到显微镜下，先用低倍镜观察，寻找细胞形状规则、形态清晰的区域，换高倍镜观察细胞内部结构。 （二）人口腔上皮细胞的观察 1.人口腔黏膜上皮细胞涂片标本的制备：在载玻片中央滴一滴1%碘液，用一根经过消毒的牙签在实验者口腔内壁轻轻刮取黏膜上皮细胞，将其放入碘液中搅动使细胞散开。染色1分钟后小心加盖玻片，方法同前。 2.将制备好的装片置于显微镜下观察。 （三）鸡血细胞的观察 1.血涂片的制备：用吸管吸取少量稀释了的鸡血，在载玻片右端滴一滴，另取一张载玻片，使其一条边缘接触血液，两玻片成30~45°，迅速向前推移，使血液被拉成均匀的薄膜。血液的大小、玻片的夹角、推移的速度对血膜的厚薄均有影响，将玻片在空气中晾干。 2.染色：在血膜上滴几滴瑞特染液，平置1分钟，再向染液中加入等量的蒸馏水，稀释染液，继续9分钟。用自来水轻轻冲洗玻片上的染液，晾干。 3.观察：分别用低倍镜和高倍镜观察血细胞的形态。 （四）鸡血细胞计数 1.细胞计数板的结构：细胞计数板是一块7.5*3.5cm2的厚玻片，通常有两个正方形计数室。计数室较周围稍低，其上覆盖一片盖玻片时，之间的距离为0.1mm。每个计数室被分成9个大方格（边长为1mm），四角的四个大格又均分为16个中方格，这四个大格通常用于白细胞计数和组织培养细胞计数。中间的大格被分成25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格，这些小方格一般用于红细胞和血小板的计数。用擦镜纸轻轻擦拭计数板，盖上盖玻片，在显微镜低倍镜下熟悉方格的布局。 2.加样：从显微镜上取下计数板，盖上盖玻片，用吸管吸取稀释的鸡血细胞悬液，滴在计数板上盖玻片的边缘，细胞悬液会因为表面张力作用自然流入计数室内（注意不要产生气泡）。静置2分钟，待细胞沉降后即可上镜观察。 3.计数：在低倍镜下按照固定方向数出计数室四个角上的每个大方格内的细胞数目，如果细胞正好停留在格线上，则按照数上不数下、数左不数右的原则计数。 4.计算：按照下列公式计算每毫升鸡血细胞悬液包含的细胞数。 细胞总数（个/毫升）=（四个大格细胞数目总和/4）*104*稀释倍数。 （五）细胞的显微测量 我们在理论课上学习过细胞的大小，知道细胞一般都很小，如一般植物细胞的直径为10~100μm，人和动物的细胞直径为10~20μm，细菌的细胞就更小了，那么有没有一种工具能够测量细胞大小呢？今天，我们就来学习一种测量细胞大小的工具——显微测微尺。 （1）、显微测微尺的组成