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衣原体 第二十章衣 原 体 重点 衣原体的生物学特性 衣原体的实验室检查 衣原体是一类有独特发育周期，专性活细胞内寄生，能通过细菌滤器的原核细胞型微生物 。我国学者汤飞凡于1956年首先成功分离鉴定出沙眼衣原体。 广泛寄生于人类和动物中，仅少数能致病。 伯杰分类 ：衣原体目 衣原体科 衣原体属 沙眼衣原体：3个变种 肺炎衣原体：4个亚种 鹦鹉热衣原体 家畜衣原体 基因组分类：四个衣原体科 特征 1. 革兰阴性，圆形或椭圆形体； 2. 具有细胞壁，其组成与革兰阴性菌相似； 3. 含DNA和RNA两种核酸； 4. 有核糖体和较复杂的酶类，能进行多种代谢, 但缺乏供代谢所需的能量来源； 5. 专性细胞内寄生,有独特的发育周期，行二分裂方式繁殖； 6. 对多种抗生素敏感。 生物学性状1.发育周期与形态染色 在宿主细胞内生长繁殖，具有独特的发育周期，在整个发育过程中，都是利用宿主细胞产生的能量和中间产物。每个周期约2-3天，可观察到两种不同的颗粒结构原体和始体，及两者形成的包涵体。 　　性状　　　　原体　　　　　始体 　形态　　　　　球形或椭圆　　　　网状 　大小（um）　　0.2－0.4　　　　0.5－1.0 　细胞壁　　　　　　+　　　　　　　- 　代谢活性　　　　　-　　　　　　　+ 　胞外稳定性　　　　+　　　　　　　- 　感染性　　　　　　+　　　　　　　- 　繁殖能力　　　　　-　　　　　　　+ 　染色性(Giemsa)　紫色　　　 　　红色 包涵体：衣原体在易感细胞内繁殖后所形成的始体　　 　　　　　和子代原体的空泡，辅助鉴别衣原体。 　　　　　Giemsa染色呈深蓝色，碘染色呈黄褐色。 2.培养特点 专性细胞内寄生，可在鸡胚卵黄囊，小鼠和培 养细胞中繁殖 3.抵抗力 抵抗力弱，耐冷怕热，对消毒剂敏感。 4.抗原结构与分型 属特异抗原 － 脂多糖，位于细胞壁 种特异抗原 － 主要外膜蛋白（MOMP） 型特异抗原 － MOMP氨基酸可变区，分型依　　 　　　　　　 据 微生物学检查法 标本采集 沙眼和包涵体结膜炎病人，用拭子在结膜上穹 窿涂擦或取结膜刮片。性病淋巴肉芽肿，采淋 巴结脓汁，也可取直肠拭子或活检材料送检。 检验程序　 直接涂片镜检 用光学显微镜观察包涵体有诊断意义，特别在眼结 膜、尿道及子宫颈上皮细胞内发现典型包涵体更有 沙眼衣原体感染的参考。采用Giemsa、碘液或荧光 抗体染色镜检，检查上皮细胞内有无包涵体。 分离培养 接种鸡胚卵黄囊或传代细胞，用直接免疫荧光法或 酶联免疫法检测。 1.细胞培养 将标本拭子，用含抗生素的稀释液制成10％-20％悬 液。分离的细胞有McCoy、Hela-229细胞等。置5％ CO2下培养。初代分离培养72-96h后传代或盲传。有 症状病人90％标本第1代即可见包涵体，而无症状病 人需传代后才得到阳性。敏感性为80％-90％，特异 性100％，是目前确诊最可靠的方法，而且是评价实 验室诊断法的标准。 2.鸡胚培养 有细菌污染的临床标本加适当的抗生素(如链霉素、 庆大霉素和制霉菌素等)肉汤，在室温中作用lh后， 接种3-4只孵育7天的鸡胚卵黄囊，35℃孵育，观察至 13天，收获卵黄囊涂片，作Gimenez染色，镜检原 体。 3.鉴定 将细胞培养盖片用Giemsa或碘染色镜检胞质内包涵 体。Giemsa染色比碘染色敏感，可作为鉴别沙眼衣原 体的参考。可用型特异性荧光血清鉴定其型别。对于 卵黄囊和小鼠分离的材料可用免疫荧光法鉴定原体或 补体结合抗原 核酸检测 1)核酸杂交：用125I标记的衣原体rDNA探针检 测宫颈标本的敏感性和特异性，与培养相比分 别为82.8％和99.4％。 2)PCR：具有高度敏感性和特异性。一般按沙 眼衣原体7．5kb质粒、MOMP序列及SrRNA 基因序列设计引物。 免疫学检测 1.抗原检测 a)免疫荧光检查：用荧光抗体检测上皮细胞内衣原体抗原。标记抗 衣原体LPS抗体，可与所有衣原体反应；而抗MOMP抗体有种、型特 异性。可在1h内即作出诊断并可分型。 b)酶免疫检测：