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实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察 一、实验目的 了解显微镜的基本构造和使用方法 掌握油镜的原理和使用方法 了解细菌的三种基本形态 二、显微镜的基本构造 三、实验原理 1、增加照明亮度 2、增加显微镜的分辨率 油镜使用的原理 油镜,即油浸物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时,由于空气与玻片的密度不同,使光线受到曲折,发生散射,降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油(其折射率与玻片的相近),则几乎不发生折射,增加了视野的进光量,从而使物象更加清晰。 显微镜的放大倍数、分辨率和数值孔径 1. 放大倍数=物镜放大倍数×目镜放大倍数 2. 分辨率 : 是表示显微镜辨析物体(两端)两点之间距离的能力,可用公式表示为: δ=0.61×λ/ N.A 式中: δ :物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ?:可见光的波长(平均0.55?m) N.A: 数值孔径 3. 数值孔径(N.A)=n×sinα/2 其意为玻片和物镜之间的折射率(n)乘以光线投射到物镜上的最大夹角(a)的一半的正弦。 四、实验器材 1、细菌三态装片 2、显微镜 3、香柏油 4、擦镜纸等 五、操作步骤 1. 放置好显微镜 2. 调节光源 3. 低倍镜观察 4. 高倍镜观察 5. 油镜观察 6. 清洁和还原显微镜 1. 放置好显微镜 置显微镜于平稳的实验台上,镜座距实验台边沿约为3~4cm。镜检者姿势要端正。 (取、放显微镜时应一手握住镜臂,一手托住底座,使显微镜保持直立、平稳。切忌用单手拎提;且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察,以减少眼睛疲劳,也便于边观察边绘图或纪录。 2. 调节好光源 接通电源,打开光源。 3. 低倍镜的观察 。将标本片放在载物台上,用标本夹夹住,调节标本移动螺旋,使观察的目的物处于物镜的正下方。 调节粗调螺旋,使物镜(10×)与标本靠近,眼睛在测向注视物镜,防止物镜和载玻片相碰。 张开双眼向目镜里观察,如果见到目的物,但不十分清楚,可用细准焦螺旋调节,至目的物清晰为止。 通过玻片夹推进器慢慢移动玻片,认真观察标本各部分,找到合适的目的物,仔细观察并记录所观察到的结果。 4.高倍镜的观察 使用高倍镜前,必须先用低倍镜观察,发现目的物后将它移至视野正中处。 旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动,这说明原来低倍镜并没有调准,目的物并没有真正找到,必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜下观察目的物有点模糊,调节细准焦螺旋,直到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上升或下降的关系,防止镜头与载玻片强力接触,损坏镜头或载玻片。 5.油镜的观察 如果用高倍镜目的物未能看清,可用油镜。先用低倍镜和高倍镜检查标本片,将目的物移到视野正中。 下降载物台,在载玻片上滴一滴香柏油,将油镜移至正中,缓慢调节粗调螺旋使油镜头浸没在油中,刚好贴近载玻片。然后再用细准焦螺旋微微向上调(切忌用粗准焦螺旋)即可。 (应特别注意不要在升降载物台时用力过猛,或者调焦时误将粗调节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片) 6. 清洁显微镜和还原显微镜 . 观察结束后,调节光源到最小再关掉电源开关。调节粗调螺旋,使载物台下降到最低,取下玻片。 . 把油镜转离光轴,擦镜纸擦1~2次,去油,用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次,再用擦镜纸擦 1~2次,顺镜头直径方向擦,不要圆周擦和来回擦。擦干净镜体,罩上防尘罩,然后放回原处。 . 用擦油镜头的方法擦玻片。 六、显微结构图的绘制 ? 严格按光学显微镜的操作方法,依低倍、高倍及油镜的次序观察细菌示范片,并绘出其形态图。 生物绘图中绘出的图要清楚,并正确的表示出形态构造的特点,绘图注意事项如下: (1) 绘图要用黑色硬铅笔,不要用软铅笔或有色铅笔,一般用 2H 铅笔为宜。 (2) 图的大小及在纸上分布的位置要适当。一般画在靠近中央稍偏左方,并向右方引出注明各部名称的线条。各引出线条要整齐平列,各部名称写在线条右边 (3) 画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓,再依照轮廓一笔画出与物象相符的线条。线条要清晰,比例要准确。较长的线条要向顺
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