液相色谱—20080124幻灯片.ppt

液相色谱法在食品检测中的应用 主要内容 第一节、概述及原理 第二节、高效液相色谱仪 第三节、高效液相色谱的类型 第四节、高效液相色谱方法的建立 第五节、维护保养 液相色谱与气相色谱法的比较 能测高沸点有机物 色谱柱一般在室温工作 柱效高于气相 分析速度与气相色谱相似 柱压高于气相色谱 检测器灵敏度与气相色谱相似 液相色谱法在食品分析中的应用 高效液相色谱法在食品分析中的应用，从80年代才开始，在国家标准《食品卫生检验方法 理化部分》GB5009-85中，尚无HPLC法，到了GB/T5009-1996中才增加此法。增加 一、常见的高效液相色谱仪器 液相色谱基本示意图 二、 输液系统 1、过滤器 由贮液瓶(罐)到高压泵的输液管入口装有过滤器，以阻止流动相中固体微粒或机械杂质进入泵体损坏高压泵或单向阀，并造成输液管路堵塞。常用过滤装置是孔径为5～10um的多孔性烧结不锈钢过滤筒。溶剂应预先过滤。 2、贮液装置 用来贮存液体流动相。一般是玻璃或不锈钢容器，体积在0.5～2升为宜。贮液瓶要求能承受一定压力，耐腐蚀，易于脱气操作。 简单的贮液器为500ml 试剂瓶，盖严，防溶剂挥发。 3 脱气装置 流动相进泵前必须脱气，尤其是水和极性溶剂。否则过柱以后，压力降低，放出溶解的空气。气泡将影响分离效率、基线不稳使检测器灵敏度降低，甚至不能正常工作。 商品成套液相色谱一般装有流动相脱气设备，如微型真空泵在线脱气，以脱除溶解在液体中的空气，防止溶解气在柱后由于压力下降而脱出，形成气泡，影响检测器正常工作。 3 脱气装置（续） 液相色谱常采用仪器外脱气，如： ①低压脱气：电磁搅拌器搅拌溶剂，水泵减压脱气，可同时加温或向溶剂通氮气。由于抽气过程中可能引起流动相中低沸点溶剂损失而影响其组成，因而不适用于多元流动相脱气。 ②超声波脱气：将溶剂贮瓶置于超声波水浴中，脱气15～20分钟，这是目前使用最广泛的脱气方法。 ③充He气在线脱气等。 4、高压输液泵 主要部件之一，压力：30～50MPa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 4、高压输液泵（续） 应具有压力平稳、脉冲小；流量稳定可调（精度在1%～2%）；耐腐蚀；泵室体积小；密封性能好等特性。 目前使用往复式 恒流泵。 5 阻尼器 高压输液泵输出的流动相具有一定脉动，很多检测器对流动相流速波动敏感，为了获得稳定的液流，在高压泵输出口常常接上脉动阻尼器。阻尼器由螺旋毛细管、波纹管等组成。 6、梯度洗脱装置 三、进样系统 1.手动进样系统 2.自动进样系统 四、分离系统 液相色谱分离系统包括：色谱柱、恒温装置、保护柱、连接管等部分。根据分析的目的物，选择适合的色谱分离系统，可以提高分离效果。 1 色谱柱 1 色谱柱（续） 1 色谱柱（续） 1 色谱柱（续） 2 恒温装置 柱温可以影响色谱分离效率。一般情况下，提高柱温可以降低流动相的粘度，增加样品在流动相中的溶解度，减小溶质的保留值。常用的柱温控制范围为室温至65℃之间。多数的样品在室温条件下即可进行分析，但恒定的柱温可以提高保留值的重现性，因此在室温变化加大的实验室配置恒温箱是很有必要的。 商品化仪器的恒温装置多采用空气循环箱恒温和色谱套柱加热恒温。一些没有配备恒温箱的仪器也有人采用水浴套管的方式恒温。 3 保护柱（预柱） 保护柱是连接在进样器和色谱柱之间的短柱。一般长为30～50mm，柱内装有填料或过滤片。 防止来自流动相和样品中的不溶性微粒对色谱柱发生的堵塞现象，起到保护色谱柱的作用。 避免硅胶和键合相的流失，起到提高色谱柱的使用寿命和不使柱效下降的作用。 由于保护柱具备造价低、使用方便等特点，且在分析食品时，样品中含有未除尽的蛋白、多糖等成分，多被采用。 3 保护柱（续） 有填料保护柱和无填料保护柱的比较： 有填料的保护柱要选择和分析柱性能相同或相近的填料。有填料的保护柱的缺点影响峰的保留时间。 无填料的保护柱一般是利用筛板的过滤作用，效果不如有填料的保护柱。 4 连接管 液相分析系统的连接管为内径为0.1～0.3mm的不锈钢管或PEEK管。 在选择管路和连接管路时，应尽量选择内径细的管路和保留尽可能短的管路， 在连接时一定要紧密，以设法降低柱外死体积，减少谱带展宽。 五、检测系统 通用型 示差折光检测器〔有时也称为折射指数，RI〕、 蒸发光散射检测器 选择性 紫外可见光检测器 二极管阵列检测器 荧光检测器 化学发光检测器 电化学检测器 五、检测