血液标本的临床检验幻灯片.pptVIP

血液及骨髓标本 的 细菌学检验 一、标本的采集 1．采血指征： 发热(≥38℃)或低温(≥36℃)寒战，白细胞增多，皮肤黏膜出血、昏迷、多器官衰竭，血压降低，C反应蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出现粒细胞减少，血小板减少等，或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采集血液培养 2．采血时机：在患者发热期间越早越好，最好在抗菌治疗前，以发热初期或高峰时为宜。 3．采血次数及间隔：对怀疑菌血症的成年病人，推荐同时在不同部位采集2-3套（包括一套需氧瓶、一套厌氧瓶或2套需氧瓶）但24小时内一般不超过3次。以后2～5天不必采血。但心内膜炎、真菌血症和导管相关性败血症应多次采集。婴幼儿病人，推荐在不同部位采集2套，可不做厌氧培养。 4．采血量　以培养基的1/10为宜。成人每穿刺点应采血5～10ml。儿童采血量适当减少，婴儿抽血量1～2ml。 5．采血方法： a. 皮肤消毒和无菌操作； b. 从肘静脉采血；对于亚急性心内膜炎等病人，应从肘动脉或股动脉采血更适宜； c. 不推荐血入瓶前换针头； 6。骨髓标本：用骨髓穿刺针从髂骨采集 7.脑脊液标本 1. 严格无菌操作，采集后置于无菌试管中，15 min内保温送到实验室，绝不可冷藏。 2. 脑脊液标本留取最小量：细菌：≧1ml（但抗酸杆菌≧2ml），真菌：≧2ml 8.标本拒收标准： 血培养瓶破裂或有明显污染 培养瓶标识与化验申请单不符 用过期的培养瓶采集标本、采血量不足 对于不合格标本，及时通知采集人员重新留取标本 二、标本的接种 1、血液标本采集后，立即注入适当的液体增菌培养基内，迅速轻摇，使充分混合，以防止凝固。 2、一般细菌用普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤，营养要求较高的细菌用肝浸液或胰胨肉汤等。 3、如果病人曾服用磺胺类药物，应在每100 ml 培养基内加对氨苯甲酸5 mg 。如果病人已用青霉素治疗，应在培养基中加入青霉素酶100 U／50 ml （青霉素酶不耐热，应在临用时加入）。若病人已用其他抗生素治疗时，可用硫酸镁肉汤增菌。 4、接种时应严格注意无菌操作，避免污染杂菌 三、细菌的培养 1、标本的自动化培养 血培养瓶置于全自动血培养仪中，阳性仪器报警 。 涂片革兰染色，镜检，结果想临床医师报告。 同时转钟血平板、麦康凯或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验。 挑取菌落涂片镜检，分别选用GPI或GNI上机进行细菌鉴定和药敏试验。 2、标本的手工培养 标本置35 ±1 ℃温箱内孵育，每天取出一次观察有无细菌生长，（注意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液变色、指示剂变色等现象）。 疑有细菌生长时，挑取培养物涂片行革兰染色镜检。及时转种血平板或其他培养基进行药敏试验或分离培养。根据菌落特征及菌体染色镜检形态，可得出初步印象，并需继续培养，按各种属细菌加以鉴定。报告：“有X X X 菌生长 如不见细菌生长，应继续培养至第7 天，取出后接种于血平板，经培养仍无细菌生长时，可报告为：“经7 天培养无细菌生长。” 对于亚急性心内膜炎病人标本，应培养一个月，才能作出结论。 3.特殊菌的培养 布鲁菌的培养：将血液标本接种于肝浸液2 支，分别置于10％二氧化碳及普通环境中35±1 ℃培养，每2天观察一次，若有菌生长，作涂片染色镜检，并移种于2 份肝浸液平板或血平板，分别置于10％二氧化碳及普通环境下培养。用菌落再作布氏杆菌血清凝集试验，如为阳性，可报告为：“培养出布氏杆菌”。必要时，进一步鉴定及分型。若培养30天后仍无细菌生长者，则可报告：“经X 周培养无细菌生长。” 四、检验程序 五、结果报告 1、阳性结果报告分为三级。 一级报告：阳性报警，涂片镜检结果（电话）通知临床，同时记录报告日期、时间、内容及接受报告人的姓名。血培养阳性应列为危急。 二级报告：报告直接药敏结果。根据涂片染色选择MH 或加血MH平板，取培养液0.2ml涂布平板，根据镜下特征选择药敏纸片，6～7个小时读取初步药敏结果。 三级报告：报告细菌种属、药敏试验、结果评价和建议。如与初步报告不符，及时与临床沟通，并在书面最终报告注明变更内容 2、阴性结果的报告 血培养72小时，未见细菌生长，应通知临床医生，以便作相应处理，但培养瓶要继续培养至第5日，方可发出阴性报告。 如发现有菌生长，可补发报告。对发出报告进行销号，并做好菌名或无菌及报告日期登记 3、结果上报 传染病（伤寒沙门菌）报医务科 传染病菌种保存，交疾病控制中心复核 六、注意事项 1.抽血后无需更换针头即可注入血液瓶中 2.抽血前应贴好标签，标签不能覆盖条形码 3.若不能立即送实验室，应置室温或35培养箱，绝不可放冰箱 4.有自动鉴定仪的实验室应24小时值班，以便及时处理阳性报警