高效液相色谱仪使用与操作规程(学生用)83383幻灯片.pptVIP

高效液相色谱仪使用与操作规程 ??Agilent 1100 HPLC Agilent1100系统组成 本系统由溶剂输送泵（四元泵，标配真空脱气机） Rheodyne 7725i手动进样阀 柱温箱 VWD紫外-可见检测器 Agilent1100色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。 第一步、准 备 1 、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。 2 、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。 3、 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂） 4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 接通电源，依次开启不间断电源、真空脱气机、四元泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。 一）参数设定 1、 波长设定： 2 、流速设定： 3 、流动相比例设定： 4、 梯度设定： 二）更换流动相并排气泡 1： 将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中； 2 ：顺时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀； 3 ：运行泵，泵以3ml/min的流速冲洗5min（可设定）后泵流速设为0ml/min； 4 ：将排液阀逆时针旋转适度拧紧，关闭排液阀。 5 ：如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。 三）平衡系统 用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 四）进 样 1 、进样前按检测器[balance]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。 2 、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了。 3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次 。 五）谱图的判断及结果计算 1、系统适用性实验： ①分离度：一般应≥1.5。 ②重复性：两次谱图的峰面积应相差不的过1%。 ③理论塔板数：应≥规定的理论塔板数目。 ④拖尾因子：0.95＜T＜1.05 ⑤保留时间：对照与样品的主成分保留时间应大致一致。 ⑥RSD： 精密度＜3% 。 2、结果计算 ①外标法： ②内标法： 第三步、清洗管路及关机 1、分析完毕后，先关检测器，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水（5%甲醇），然后用甲醇-水冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15～30分钟，最后用甲醇保留色谱柱，特殊情况应延长冲洗时间。 2、 冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。 3 、关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压，使用小时数，仪器完好状态等。 第四步、注意事项 一、流动相 1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围； 2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质； 3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相； A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。 二、样品 1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒； 2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液； 3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍； 第四步、注意事项 三、色谱柱 1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等； 2、使用符合要求的流动相； 3、使用保护柱； 4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。 5、 色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存； 6、 不要高压冲洗柱子； 7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱； 使用过程中注意轻拿轻放。 第四步、注意事项 四、操作过程 1、 开机操作： （1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）； （